[發明專利]一種‘大丁香’荔枝品種離體再生的方法

有效

• 申請號: 202010025153.7
• 申請日: 2020-01-10
• 公開（公告）號: CN111084106B
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發明（設計）人: 王果;門佳麗;李煥苓;王家保;王樹軍;李芳;孫進華
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院環境與植物保護研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種荔枝離體再生的方法，包括下述步驟：

1）以荔枝花藥為外植體，將所述荔枝花藥在愈傷組織誘導培養基中進行愈傷組織誘導培養，得到胚性愈傷組織；

所述愈傷組織誘導培養基由MS培養基、2,4-D、蔗糖和瓊脂組成；

所述2,4-D在所述愈傷組織誘導培養基中的終濃度為0.5-3?mg/L；

2）將所述胚性愈傷組織在體細胞胚誘導培養基中進行體細胞胚誘導培養，得到體細胞胚；

所述體細胞胚誘導培養基由MS培養基、IAA、ABA、6-BA、肌醇、水解乳蛋白、椰乳、蔗糖和瓊脂組成；

所述IAA在所述體細胞胚誘導培養基中的終濃度為0.5-2?mg/L；

所述ABA在所述體細胞胚誘導培養基中的終濃度為0.5-2?mg/L；

所述6-BA在所述體細胞胚誘導培養基中的終濃度為0.5-2?mg/L；

所述肌醇在所述體細胞胚誘導培養基中的終濃度為50-200?mg/L；

所述水解乳蛋白在所述體細胞胚誘導培養基中的終濃度為300-500?mg/L；

所述椰乳在所述體細胞胚誘導培養基中的終濃度為50-200?ml/L；

3）將所述體細胞胚在成熟培養基中進行成熟培養，得到成熟的體細胞胚；

所述成熟培養基由MS培養基、椰乳、蔗糖和瓊脂組成；

所述椰乳在所述成熟培養基中的終濃度為50-200?ml/L；

4）將所述成熟的體細胞胚在再生培養基中進行再生培養，得到再生植株；所述再生培養基由1/2MS培養基、6-BA、GA₃、蔗糖和瓊脂組成；

所述6-BA在所述再生培養基中的終濃度為0.1-1?mg/L；

所述GA₃在所述再生培養基中的終濃度為0.1-1?mg/L；

所述荔枝品種為大丁香。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述1）中，所述培養條件如下：23-27?℃暗培養45-60天。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述2）中，所述培養條件如下：23-27?℃暗培養30-45天。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述3）中，所述培養條件如下：23-27?℃黑暗培養50-65天。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述4）中，所述培養條件如下：23-27?℃光照培養10-20天，光照強度為1800-2500?Lx，光照時間為15-17小時/天。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述1）還包括將胚性愈傷組織進行繼代培養的步驟；所述繼代培養的方法包括如下步驟：挑選淡黃色、松散型的胚性愈傷組織在繼代培養基I和繼代培養基II中交替培養；

所述繼代培養基I由MS培養基、2,4-D、蔗糖和瓊脂組成；

所述繼代培養基II由MS培養基、2,4-D、KT、AgNO₃、蔗糖和瓊脂組成；

所述2,4-D在所述繼代培養基I中的終濃度為0.5-2?mg/L；

所述2,4-D在所述繼代培養基II中的終濃度為0.5-2?mg/L；

所述KT在所述繼代培養基II中的終濃度為0.5-2?mg/L；

所述AgNO₃在所述繼代培養基II中的終濃度為3-7?mg/L。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述繼代培養條件如下：23-27?℃、暗培養；每隔20-25天繼代一次，繼代的次數為2-4次。

8.用于荔枝離體再生的成套培養基，其包括權利要求1-7任一中所述的愈傷組織誘導培養基、權利要求1-7任一中所述的體細胞胚誘導培養基、權利要求1-7任一中所述的成熟培養基、權利要求1-7任一中所述的再生培養基、權利要求6或7中任一中所述的繼代培養基I和權利要求6或7任一中所述的繼代培養基II；所述荔枝品種為大丁香。