[發(fā)明專利]一種高產(chǎn)L-高絲氨酸的重組菌及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010025126.X
• 申請(qǐng)日: 2020-01-10
• 公開（公告）號(hào): CN113122487B
• 公開（公告）日: 2022-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 牟慶璇;張莎莎;王麗敏;陶勇;于波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院微生物研究所
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12N15/70;C12N15/77;C12N15/75;C12N15/78;C12P13/08;C12P13/06;C12R1/19;C12R1/15;C12R1/07;C12R1/38
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 白艷

1.重組菌，通過改造底盤宿主菌中的如下A）和B）的2個(gè)途徑，得到的重組菌：

A）加強(qiáng)底盤宿主菌中富馬酸到天冬氨酸的代謝途徑，使從草酰乙酸到L-天冬氨酸和從富馬酸到L-天冬氨酸這2個(gè)途徑代謝流量1:1 匹配，

B）加強(qiáng)所述底盤宿主菌中的天冬氨酸到高絲氨酸代謝途徑；

所述加強(qiáng)富馬酸到天冬氨酸的代謝途徑是通過如下1）和2）的方式實(shí)現(xiàn)：1）提高所述底盤宿主菌中天冬氨酸氨基裂解酶aspA的活性或其編碼基因的表達(dá)；2）降低或抑制所述底盤宿主菌中乙醛酸途徑抑制蛋白iclR的活性或其編碼基因的表達(dá)量；

所述底盤宿主菌為在具有天冬氨酸到蘇氨酸通路的細(xì)菌中進(jìn)行如下a-e全部的改造，其他基因不變得到的菌：

a、降低或抑制所述細(xì)菌中DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄抑制因子 lacI的活性或其編碼基因的表達(dá)量；

b、降低或抑制所述細(xì)菌中高絲氨酸琥珀酰轉(zhuǎn)移酶metA的活性或其編碼基因的表達(dá)量；

c、降低或抑制所述細(xì)菌中二氨基庚酸脫羧酶lysA的活性或其編碼基因的表達(dá)量；

d、降低或抑制所述細(xì)菌中的高絲氨酸激酶thrB的活性或其編碼基因的表達(dá)量；

e、降低或抑制所述細(xì)菌中的可溶性吡啶核苷酸轉(zhuǎn)移酶sthA的活性或其編碼基因的表達(dá)量；所述加強(qiáng)天冬氨酸到高絲氨酸代謝途徑是通過如下3）、4）和5）的方式實(shí)現(xiàn)：3）使所述底盤宿主菌表達(dá)天冬氨酸激酶I突變體thrA*；4）提高所述底盤宿主菌中天冬氨酸半醛脫氫酶asd的活性或其編碼基因的表達(dá)量；5）提高所述底盤宿主菌中高絲氨酸外泵蛋白rhtB的活性或其編碼基因的表達(dá)量實(shí)現(xiàn)；

所述細(xì)菌為大腸桿菌、谷氨酸棒桿菌、芽孢桿菌或假單胞菌。

2.重組菌，通過將底盤宿主菌進(jìn)行如下1）-5）中全部改造，得到重組菌：

1）提高底盤宿主菌中天冬氨酸氨基裂解酶aspA的活性或其編碼基因的表達(dá)；2）降低或抑制所述底盤宿主菌中乙醛酸途徑抑制蛋白iclR的活性或其編碼基因的表達(dá)量；3）使所述底盤宿主菌表達(dá)天冬氨酸激酶I突變體thrA*；4）提高所述底盤宿主菌中天冬氨酸半醛脫氫酶asd的活性或其編碼基因的表達(dá)量；5）提高所述底盤宿主菌中高絲氨酸外泵蛋白rhtB的活性或其編碼基因的表達(dá)量實(shí)現(xiàn)；

所述底盤宿主菌為在具有天冬氨酸到蘇氨酸通路的細(xì)菌中進(jìn)行如下a-e全部的改造，其他基因不變得到的菌：

a、降低或抑制所述細(xì)菌中DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄抑制因子 lacI的活性或其編碼基因的表達(dá)量；

b、降低或抑制所述細(xì)菌中高絲氨酸琥珀酰轉(zhuǎn)移酶metA的活性或其編碼基因的表達(dá)量；

c、降低或抑制所述細(xì)菌中二氨基庚酸脫羧酶lysA的活性或其編碼基因的表達(dá)量；

d、降低或抑制所述細(xì)菌中的高絲氨酸激酶thrB的活性或其編碼基因的表達(dá)量；

e、降低或抑制所述細(xì)菌中的可溶性吡啶核苷酸轉(zhuǎn)移酶sthA的活性或其編碼基因的表達(dá)量；

所述細(xì)菌為大腸桿菌、谷氨酸棒桿菌、芽孢桿菌或假單胞菌。