[發明專利]一種烷化劑和核酸堿基誘變纖維用竹愈傷組織的育苗方法

在審

• 申請號: 202010023814.2
• 申請日: 2020-01-09
• 公開（公告）號: CN111011210A
• 公開（公告）日: 2020-04-17
• 發明（設計）人: 胡尚連;羅學剛;曹穎;黃艷;王博雅
• 申請（專利權）人: 西南科技大學
• 主分類號: A01H1/06
• 分類號: A01H1/06;A01H4/00
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 馬超前

本發明公開了一種烷化劑和核酸堿基誘變纖維用竹愈傷組織的育苗方法，選取竹分枝莖芽誘導的愈傷組織，將乙烯亞胺和核酸堿基類似物馬來酰肼混合配制誘變溶液，通過注射誘變溶液進行內照射，再經誘變溶液震蕩處理，接種在分化培養基上培養后，經生根培養基培養，15～30天后獲得完整的再生植株，用EST?SSR分子標記技術篩選得到突變體植株，篩選具有優良性狀的纖維用竹新種質。本發明具有操作簡單，選育材料廣泛，后代性狀穩定快，選育時間短的特點。

技術領域

本發明屬于植物輻射誘變育種技術領域，具體涉及一種烷化劑和核酸堿基誘變纖維用竹愈傷組織的育苗方法。

背景技術

制漿造紙工業是中國乃至世界經濟的重要支柱產業之一，在我國經濟飛速發展的同時，對紙的需求量會迅速不斷的增加。由于在我國森林資源比較短缺和森林保護系列相關的法律政策的不斷完善，以及造紙產業鏈中的廢紙回收利用率比較低，木材資源的缺口很大程度上只能依靠進口來彌補，國家不得不花費大量的資金進口木材和木漿。然而，竹作為一種在我國分布廣泛的植物自然資源，具有分布廣、適應性強、生長快、成才早、經濟價值高等特點，一次造林成功后，經過3-5年就可以年年砍伐，且持續幾十年以致上百年。竹材的纖維素含量在40％-60％，其優良的制漿性能可與部分木材纖維比美，并且竹漿的纖維形態質量介于草漿和木漿之間，更接近于木漿，這些都促使其成為一種優良的非木材類造紙原材料。因此，培育生物量大、纖維素高的漿用竹品種對提高竹漿造紙的可持續發展有重要意義。

中國是利用竹材造紙最早的國家，已有1700多年的歷史。全球約有1200余種竹，中國約有39屬600余種。常用制漿竹材僅是30多種原生鄉土叢生混合竹種。中國的竹子研究歷史和現狀相對領先于世界其它國家，但由于竹子遺傳背景的復雜性和生物學的特殊性，即竹類植物開花具有不確定性，且開花后即死亡等特點，很難通過傳統的育種方法對其進行品種改良。現有纖維用竹良種選育主要是從自然突變選育或從異地引種馴化進行無性繁殖，而且品種類型比較單一。此外，竹類遺傳轉化體系尚不成熟，很難通過基因工程的手段對其進行遺傳改良。迄今為止，還沒有建立一套纖維用竹新種質資源創制和篩選的現代生物技術體系。隨著竹材工業化利用的快速發展以及人們生活水平的不斷提高，對定向培育適合不同用途的纖維用竹新品種的創制和選育提出了更新更高的要求。

竹稈上在某些節處可以長出分枝，分枝的莖節處可以萌發出芽，易于取材，易于離體誘導愈傷組織并獲得再生植株的良好外植體材料。

發明內容

本發明的目的在于提供一種烷化劑和核酸堿基誘變纖維用竹愈傷組織的育苗方法，以定向培育出不同用途的優質速生竹材并加工出優質竹纖維原料的纖維用竹新種質。

本發明具體通過以下技術方案實現：

一種烷化劑和核酸堿基誘變纖維用竹愈傷組織的育苗方法，包括以下步驟：

1)選取纖維素含量40％～60％、木質素含量20％～30％的竹子，取其分枝莖芽誘導的愈傷組織；

2)將乙烯亞胺和核酸堿基類似物馬來酰肼混合配制誘變溶液；

3)將得到誘變溶液注射入愈傷組織；

4)將注有誘變溶液的愈傷組織置于誘變溶液中震蕩處理；

5)震蕩誘變的愈傷組織接種在分化培養基上培養后，經生根培養基培養，15～30天后獲得完整的再生植株；

6)用EST-SSR分子標記篩選得到突變體植株，篩選具有優良性狀的纖維用竹新種質。

進一步的，步驟(1)中所述的竹子選自慈竹、梁山慈竹、綠竹、硬頭黃竹、孝順竹、佯黃竹、牡竹、青皮竹或粉單竹中之一種。

進一步的，步驟(1)中所述的分枝莖芽采用MS2培養基誘導培養。