[發明專利]一種分子探針及其制備方法與應用在審
| 申請號： | 202010022854.5 | 申請日： | 2020-01-09 |
| 公開（公告）號： | CN111217909A | 公開（公告）日： | 2020-06-02 |
| 發明（設計）人： | 姜慧杰;姜昊;張茗昱;張琳焓;藺雪 | 申請（專利權）人： | 哈爾濱醫科大學 |
| 主分類號： | C07K16/28 | 分類號： | C07K16/28;G01N33/574;G01N33/577;G01N21/64 |
| 代理公司： | 成都東恒知盛知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 51304 | 代理人： | 何健雄;廖祥文 |
| 地址： | 150081 黑龍*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 分子 探針 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種分子探針，其特征在于，該探針為NIR-PD-L1-mAb，所述的NIR-PD-L1-mAb化學結構式為
2.一種分子探針的制備方法，其特征在于，具體包括以下步驟：
a、純化抗PD-L1單克隆抗體得到PD-L1 mAb；
b、將近紅外光學染料加入DMSO溶液，配制成濃度為5mg/ml的溶液；
c、取1～10mg/ml的PD-L1 mAb放入離心管中，加入0.2mol/L～1.0mol/L的緩沖液混勻，PD-L1 mAb與緩沖液的體積比為1:1，混勻后加入步驟b所得溶液，立即混勻，將混合液放入20～25℃水浴避光反應2小時；
d、用PD-10柱純化，合并蛋白峰管。
3.根據權利要求2所述的一種分子探針的制備方法，其特征在于，所述緩沖液為硼酸鹽緩沖液或磷酸鹽緩沖液。
4.根據權利要求2所述的一種分子探針的制備方法，其特征在于，所述緩沖液PH值為8.3～8.9。
5.根據權利要求2所述的一種分子探針的制備方法，其特征在于，所述近紅外熒光染料為800CW NHS Ester。
6.根據權利要求2所述的一種分子探針的制備方法，其特征在于，所述PD-L1 mAb與800CW NHS Ester的摩爾比為1:1.1～1:3。
7.根據權利要求2所述的一種分子探針的制備方法，其特征在于，所述步驟a中純化的具體步驟為：
1)用Na2HPO4與M NaH2PO4配制50mmol/L的磷酸鹽緩沖液，Na2HPO4與NaH2PO4的摩爾比為1:1，PH為8.5；
2)用上述緩沖液將一根新的PD-10柱平衡；
3)抗體濃度的測定：取Anti-PD-1抗體用紫外分光光度計測量OD280nm和OD260nm，計算抗體濃度；
4)將步驟3的抗PD-1抗體全部上PD-1柱純化，去除疊氮化鈉，用磷酸鹽緩沖液洗脫，收集蛋白峰管；
5)合并蛋白峰管后冷凍干燥。
8.基于權利要求1所述的一種分子探針的應用，其特征在于，所述應用為一種分子探針在制備一種用于檢測結直腸癌細胞中PD-L1的表達水平的顯影劑中的應用。
9.基于權利要求1所述的一種分子探針的應用，其特征在于，所述應用為一種分子探針在用于檢測結直腸癌細胞中PD-L1的表達水平的試劑盒中的應用。
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