[發(fā)明專利]一種用于評(píng)價(jià)牛精液品質(zhì)的遺傳標(biāo)記物及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010022266.1
• 申請(qǐng)日: 2020-01-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113106159B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-05-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 滑國(guó)華;張燊;孫暉;邵寶順;曹家瑄;杜超;林雨昕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京智為時(shí)代知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11498
• 代理人: 王加嶺;楊靜

本發(fā)明屬于牛的遺傳標(biāo)記制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種與精液品質(zhì)性狀關(guān)聯(lián)的遺傳標(biāo)記，該標(biāo)記從牛FHL2基因中篩選得到，其序列為如SEQ ID NO.1所示的第648bp?1170bp的核苷酸序列，在該序列第879位堿基r處發(fā)生一個(gè)T/G堿基突變，導(dǎo)致FHL2基因多態(tài)性。公開(kāi)了牛FHL2基因promoter區(qū)的SNP分型檢測(cè)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)在SEQ ID NO.1所示的第879位堿基處T/G突變位點(diǎn)與平均采精量性狀顯著相關(guān)。本發(fā)明為牛繁殖性狀標(biāo)記輔助選擇提供了新的遺傳標(biāo)記。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于牛的標(biāo)記輔助選擇技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于評(píng)價(jià)牛精液 品質(zhì)的遺傳標(biāo)記物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著冷凍精液以及同期發(fā)情-定時(shí)輸精技術(shù)的廣泛使用，優(yōu)質(zhì)種公牛的繁 殖能力獲得了極大地展現(xiàn)，其遺傳改良能力也得到了更大地發(fā)揮。大量研究 數(shù)據(jù)表明，種公牛的優(yōu)劣對(duì)奶牛群體遺傳改良至關(guān)重要，其占據(jù)了奶牛群體 遺傳改良進(jìn)展的70％。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，分子標(biāo)記技術(shù)的出現(xiàn)彌補(bǔ)了 基于表型選擇的傳統(tǒng)育種方法的不足，促進(jìn)了育種效率和進(jìn)程。

牛分子育種的研究和應(yīng)用也在快速發(fā)展，發(fā)現(xiàn)了一些與精液品質(zhì)性狀有 關(guān)聯(lián)的功能基因和基因類型。FSH基因通過(guò)其受體FSHR介導(dǎo)，在雄性動(dòng)物生 精上皮發(fā)育和精子形成過(guò)程中發(fā)揮重要作用。FSHβ基因上游調(diào)控區(qū)的5個(gè) SNPs與精液中精子濃度、精子畸形率以及頂體完整率顯著相關(guān)(P0.05)。 FSHR基因5’UTR和第1外顯子的突變可能與原精活力(P0.05)、頂體完整 率(P0.01)相關(guān)。此外，其他生殖激素相關(guān)基因存在的突變，也會(huì)導(dǎo)致精 液品質(zhì)性狀的改變，如，GnRH基因第2外顯子的突變、LHR基因第9內(nèi)含子 的突變以及AR基因的CAG重復(fù)長(zhǎng)度和頻數(shù)、其第4外顯子的突變等。

目前，全基因組關(guān)聯(lián)分析(GWAS)涉及牛生育能力的研究較少。據(jù)報(bào) 道，篩選出候選基因，如PRM1，PRM2，GnRHR，CD9，PDGFRβ，MARCH1 等與牛精液品質(zhì)性狀關(guān)聯(lián)。Puglisi等利用Illumina BovineHD chip(777K)對(duì) 105頭荷斯坦公牛進(jìn)行分析，檢測(cè)出多個(gè)與精子質(zhì)量性狀顯著相關(guān)的SNPs位 點(diǎn)。Qin等利用GWAS鑒定出中國(guó)荷斯坦奶牛群中19個(gè)與精液品質(zhì)性狀顯著相 關(guān)的SNPs位點(diǎn)以及8個(gè)新的候選基因。

LIM-only蛋白FHL2(Four and a half LIM domains 2)作為L(zhǎng)IM-Only蛋白 家族的一員，在機(jī)體內(nèi)多種組織中有表達(dá)(Günther et al 2005)。研究表明，F(xiàn)HL2可以參與早期性腺的分化。在前列腺癌早期，F(xiàn)HL2與AR表達(dá)量較低， 但在癌癥中后期表達(dá)水平升高。同時(shí)FHL2不僅可以激活正常的AR，還能與 突變的AR互作，誘導(dǎo)惡性前列腺癌的發(fā)生。這都表明了FHL2可能在雄性生 殖中發(fā)揮重要作用。但目前沒(méi)有關(guān)于FHL2是否影響精液品質(zhì)性狀的研究報(bào) 道，也沒(méi)有能用評(píng)價(jià)牛精液品質(zhì)的試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種用于評(píng)價(jià)牛精液品質(zhì)的遺傳標(biāo) 記物及其應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下的技術(shù)方案為：

一種用于評(píng)價(jià)牛精液品質(zhì)的遺傳標(biāo)記物，該遺傳標(biāo)記物的核苷酸序列為 如SEQID NO.1所示的第648bp-1170bp，在SEQ ID NO.1所示片段內(nèi)的第 879bp處的r為T(mén)/G堿基的核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)。

如上所述用于評(píng)價(jià)牛精液品質(zhì)的遺傳標(biāo)記物，在如SEQ ID NO.1所示片 段內(nèi)的T879G位點(diǎn)為T(mén)T基因型或TG基因型，說(shuō)明牛精液品質(zhì)優(yōu)良。

如上所述的遺傳標(biāo)記在牛精液品質(zhì)性狀輔助選擇中的應(yīng)用。

一種用于評(píng)價(jià)牛精液品質(zhì)的檢測(cè)試劑盒，其包括如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示引物對(duì)。