[發(fā)明專利]一種偽狂犬病毒弱毒株及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010021958.4
• 申請(qǐng)日: 2020-01-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111154733A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李守軍;孫陽(yáng)陽(yáng);張學(xué)賢;辛波;車艷杰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津瑞普生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N7/01
• 分類號(hào): C12N7/01;C12N15/869;A61K39/245;A61P31/22;C12R1/93
• 代理公司: 天津合正知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12229
• 代理人: 馬云云

1.一種偽狂犬病毒弱毒株，其特征在于，所述弱毒株是同時(shí)缺失了部分TK氨基酸序列、部分GE氨基酸序列、部分11K氨基酸序列以及gE基因第56位堿基至11K基因的103位堿基間的基因序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的偽狂犬病毒弱毒株，其特征在于，所述弱毒株缺失部分的氨基酸序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:3所示，所述基因序列如SEQ ID NO:4所示。

3.一種如權(quán)利要求1所述的偽狂犬病毒弱毒株制備的偽狂犬病毒疫苗。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的偽狂犬病毒弱毒株，其特征在于，該弱毒株的重組偽狂犬病毒的制備方法包括以下步驟：

(1)將pHA2質(zhì)粒重組到豬偽狂犬病毒的TK基因內(nèi)，獲得rPRV；

(2)將rPRV基因組轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH10B菌株，擴(kuò)增獲得pPRV；

(3)然后將pPRV轉(zhuǎn)化至大腸桿菌GS1783中；

(4)通過(guò)Red/ET兩步重組法在GS1783中缺失掉gE、11K基因；

(5)在步驟(4)獲得的產(chǎn)物中提取質(zhì)粒pPRV-dTK-dgE-d11K；

(6)將步驟(5)提取的質(zhì)粒用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法，轉(zhuǎn)染至BHK-21細(xì)胞；

(7)提取感染性克隆質(zhì)粒與轉(zhuǎn)移載體共轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞，通過(guò)同源重組將BAC質(zhì)粒去掉，得到缺失TK、gE、11K中部分基因的重組偽狂犬病毒。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組偽狂犬病毒弱毒株，其特征在于構(gòu)建該重組偽狂犬病毒弱毒株的載體包括：偽狂犬病毒TK基因和11K基因的部分序列。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的構(gòu)建該重組偽狂犬病毒弱毒株的載體，其特征在于該載體還包括：CMV啟動(dòng)子控制下的EGFP基因。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的偽狂犬病毒疫苗，其特征在于，該疫苗的免疫方式包括滴鼻和注射。