[發明專利]CD47抗體在肝癌放療敏感性檢測試劑盒中的應用

在審

• 申請號: 202010021665.6
• 申請日: 2020-01-09
• 公開（公告）號: CN111122876A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 程樹群;衛旭彪;蔣亞波
• 申請（專利權）人: 上海東方肝膽外科醫院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 輦甲武

本發明提供CD47抗體在肝癌放療敏感性檢測試劑盒中的應用。本發明的優勢在于(a)提供了預測用于肝放療治療效果的標志物，有助于患者治療方案的選擇。(b)提前分析患者對放療的敏感性，避免無效治療。(c)外周血CD47的檢測方法更方便快速，更容易為病人接受。

技術領域

本發明涉及一種CD47抗體在肝癌放療敏感性檢測試劑盒中的應用，屬于生物檢測領域。

背景技術

原發性肝癌(以下簡稱肝癌)是全球發病率六、死亡率第三的癌癥。此外，肝癌合并門靜脈癌栓的發生率較高。一旦合并門靜脈癌栓，患者預后往往很差。因此，門靜脈癌栓是影響肝癌預后的一個重要因素。近年來，隨著科學技術的發展和醫療水平的提高，特別是手術方法的改進和多學科診療觀念的普及，肝癌合并門靜脈癌栓的治療有了長足的進步。2004年，本團隊針對門靜脈癌栓侵犯門靜脈的不同嚴重程度，在國內首次提出了門靜脈癌栓的分型。具體如下：根據癌栓的發展程度(即侵犯不同門靜脈部位)，將癌栓分為I-IV型：微血管癌栓為I0期，癌栓累及二級以上門靜脈分支者為I型；累及一級門靜脈分支者為II型；累及門靜脈主干者為III型；累及腸系膜上靜脈或下腔靜脈者為IV型。

目前對可切除肝癌伴I型、II型門靜脈癌栓的治療方案，手術為首要選擇的方案為大家所接受。然而對于III、IV型門靜脈癌栓的治療，目前仍存在爭議。因此，對存在有爭議的III、IV型門脈癌栓的治療，我們設計前瞻性臨床研究，一組給予手術治療，一組給予術前小劑量癌栓放療，3周后再次復查肝臟薄層CT，以數字三維重建技術確定腫瘤及癌栓的體積范圍，明確放療效果及輔助手術定位，并行降期手術治療。最終對比兩組患者的預后發現，III、IV型癌栓放療+降期手術治療組患者的療效明顯好于單純手術組。但是，肝癌患者的放療療效明顯不同，因此急需一種能夠精確地為臨床III、IV型癌栓病人的治療提供指導的技術。

發明內容

為了更精確地為臨床III、IV型癌栓病人的治療提供指導，我們檢測了放療組患者血清及術后組織中的表達發現CD47與肝癌放療的結果具有相關性。因此，本發明構建CD47抗體在檢測試劑盒中的應用，以幫助提前判斷患者是否適合放療治療，為臨床更好的改善患者預后提供診斷幫助。

本發明采用了如下技術方案：

CD47抗體在肝癌放療敏感性檢測試劑盒中的應用。

進一步，本發明的應用，包括如下步驟：

步驟一，制作組織切片，

步驟二，組織切片中CD47表達水平的檢測,

步驟三，評分和判斷。

進一步，本發明的應用，還具有這樣的特征：

步驟一中，采用石蠟包埋法制作組織切片，包括步驟:

(i)取樣30min內放入固定液中，固定液的用量為組織塊的20倍左右，固定時間為24h，固定液包括10％福爾馬林、4％多聚甲醛或10％磷酸緩沖福爾馬林；

(ii)固定后的樣本經流水沖洗(4～6h)后，用不同濃度的乙醇進行脫水處理，乙醇濃度為：30％→50％→70％→80％→90％→95％→100％(I)→100％(II)，每種濃度的乙醇體積為組織塊50倍左右，時間總長約2～3h；

(iii)將組織塊放于二甲苯與無水乙醇比例為1:1的透明劑中1h，再置于二甲苯中透明20min；

(iv)將透明后的組織塊放入溶解狀態的普通石蠟中1h，讓材料里含有石蠟，浸蠟后的組織塊放在裝有蠟液的容器中(擺好在蠟中的位置)，待蠟液表層凝固即迅速放入冷水中冷卻，制成含有組織塊的蠟塊；