[發明專利]一種基于鈷基金屬有機框架物雙重放大苝四羧酸信號構建電化學發光傳感器的方法

有效

• 申請號: 202010020184.3
• 申請日: 2020-01-09
• 公開（公告）號: CN111208178B
• 公開（公告）日: 2022-12-06
• 發明（設計）人: 宋先震;魏琴;羅川南;范大偉;任祥;孫曉君;邵鑫榮
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/30
• 分類號: G01N27/30;G01N27/327
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) 37240
• 代理人: 趙鳳

1.一種基于鈷基金屬有機框架物雙重放大苝四羧酸信號構建電化學發光傳感器的方法，其特征在于：

將直徑為4 mm的玻碳電極用三氧化二鋁泥漿拋光得到鏡狀表面，并用超純水沖洗干凈；將處理好的電極浸入質量分數為1%的HAuCl₄中，在-0.2 V的恒定電壓下電沉積一層AuNPs，沉積時間為30 s；將沉積完畢的電極浸入50 ng/mL的HGC溶液中2 h，以通過金硫鍵結合一定量的HGC；將8 μL 5 μg/mL的Ab₁滴涂于電極表面，在4 ℃下進行孵化；將3 μL質量分數為1 %的牛血清白蛋白滴涂于電極表面，以封閉Ab₁上非特異性活性位點；將5 μL不同濃度的Aβ滴涂于電極表面，4 ℃下孵化1 h；將8 μL 4 - 6 μg/mL的Ab₂-Au-PTCA@ZIF-67滴涂于電極表面，4 ℃下孵化2 h，即實現了基于鈷基金屬有機框架物雙重放大苝四羧酸信號的電化學發光傳感器的構建；

如上所述電化學發光傳感器構建過程中，每一步都需將修飾后的電極用超純水輕輕沖洗，以去除未完全結合的生物分子。

2.如權利要求1所述的一種基于鈷基金屬有機框架物雙重放大苝四羧酸信號構建電化學發光傳感器的方法，所述苝四羧酸和鈷基金屬有機框架物的制備，其特征在于，步驟如下：

將0.1 g苝四羧酸二酐分散在50 mL的NaOH溶液中，攪拌至其完全溶解；隨后，將稀釋后濃度為1 M的HCl溶液緩慢加入到上述溶液中，至其顏色從黃綠色變為紅色為止；接下來，將上述混合溶液離心并用超純水和乙醇交替洗滌，洗滌至其pH為7.4；最后，將獲得的苝四羧酸分散在超純水中備用；

將5 mM的Co(NO₃)₂和20 mM的2-甲基咪唑分別溶解在含有甲醇和乙醇的混合溶液中，其中甲醇和乙醇的體積比為1:1；隨后，將上述得到的兩種溶液混合，溶液顏色迅速變為紫色，混合完畢后，將所得混合物靜置24 h；最后，通過離心和甲醇洗滌獲得ZIF-67，并將其溶于超純水中備用。

3.如權利要求1所述的一種基于鈷基金屬有機框架物雙重放大苝四羧酸信號構建電化學發光傳感器的方法，所述Ab₂-Au-PTCA@ZIF-67的制備，其特征在于，步驟如下：

首先，將制得的ZIF-67溶于甲苯中，然后將1 mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷加入其中，超聲處理50 min；隨后，將所得混合溶液轉移至高溫高壓反應釜中，在90 ℃下反應24 h，得到氨基化的ZIF-67；接下來，將2 mL包含40 mM的EDC和10 mM的NHS混合溶液加入5 mL制得的苝四羧酸溶液中，在4 ℃下反應1 h，然后與5 mL 氨基化的ZIF-67反應；隨后，在磁力攪拌下將1 mL質量分數為1 %的HAuCl₄溶液和20 mg聚乙烯吡咯烷酮加入其中，攪拌12 h后，加入4 mL 50 mM的檸檬酸鈉溶液和微量NaBH₄，進一步攪拌12 h，再將所得混合溶液離心洗滌去除未結合的Au NPs，并將其溶于pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液中；最后，將牛血清白蛋白和Ab₂依次加入上述溶液中，在4 ℃下孵育12 h，即成功制備了Ab₂-Au-PTCA@ ZIF-67。

4.如權利要求1所述的一種基于鈷基金屬有機框架物雙重放大苝四羧酸信號構建電化學發光傳感器的方法，所述電化學發光傳感器的測試條件，其特征在于：

將銀/氯化銀電極作為參比電極、鉑絲電極作為對電極、所構建傳感器作為工作電極構建三電極體系；將上述三電極連接在化學發光檢測儀的暗盒中，并將電化學工作站和化學發光檢測儀連接在一起，光電倍增管高壓設置為600 V，掃描電壓設置為-1.6 - 0 V，掃描速率設置為0.1 V/s；使用10-100 mmol/L的K₂S₂O₈溶液作為檢測底液，基于三電極體系檢測電化學發光信號；所述K₂S₂O₈溶液，pH為6.5 - 8.5，利用10 - 100 mmol/L的K₂S₂O₈和100mmol/L的KCl溶于0.1 M的磷酸鹽緩沖溶液配制。