[發明專利]磷酸酶PHLPP2在制備維生素C治療胰腺癌預后標志物制劑中的應用

有效

• 申請號: 202010019338.7
• 申請日: 2020-01-08
• 公開（公告）號: CN113088554B
• 公開（公告）日: 2023-10-24
• 發明（設計）人: 劉杰;駱菲菲;陳琳;宋歡
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬華山醫院
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 上海容慧專利代理事務所(普通合伙) 31287
• 代理人: 于曉菁

本發明屬生物技術領域，涉及磷酸酶PHLPP2作為生物標志物中的用途，尤其涉及PHLPP2在制備維生素C治療胰腺癌預后標志物制劑中的應用。本發明所述磷酸酶其PH結構域富含亮氨酸重復蛋白磷酸酶2，能使Akt、RAF1等的相應保守位點直接去磷酸化，從而促進細胞凋亡和抑制細胞增殖和遷移；經試驗表明，降低PHLPP2的表達水平，可抑制維生素C對胰腺癌腫瘤的殺傷作用，PHLPP2的高表達與病人生存期呈正相關，與TNM分期呈負相關，所述PHLPP2可作為維生素C治療胰腺癌的潛在生物標志物，進一步用于制備維生素C治療胰腺癌的預后標志物制劑。

技術領域

本發明生物技術領域，涉及一種磷酸酶PHLPP2作為生物標志物中的用途，尤其涉及PHLPP2在制備維生素C治療胰腺癌預后標志物制劑中的應用。

背景技術

據報道，胰腺癌是高度致命疾病，最新數據顯示在美國每年約有56770例新發病例和45750例死亡。臨床實踐顯示，由于診斷的滯后性和治療的耐藥性，胰腺癌患者的預后極差，5年生存率保持在6％。研究報道了維生素C在體內外均有殺傷腫瘤的效果，但是最近的胰腺癌臨床試驗研究和案例研究均未能明確維生素C的臨床療效或者僅僅闡述了維生素C能改善病人的生活質量和提高化療的敏感性。這提示有關醫療實踐中需要生物標志物來識別不同個體VC治療的敏感性。PHLPP家族是絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶，由PHLPP1和PHLLP2兩個基因編碼。PHLPP1主要有2個主要的剪切體，PHLPP1α(1205個氨基酸)和PHLPP1β(1717個氨基酸，也被稱為suprachiasmatic nucleus oscillatory protein,SCOP)，PHLPP2由1323個氨基酸組成。研究顯示，PHLPP1/2基因都位于癌癥通常缺失的染色體區域，這與它們的腫瘤抑制效果是一致的。PHLPP已被證實能通過去磷酸化Akt使其失去活性,從而負向調節Akt。有研究發現在非小細胞肺癌細胞和乳腺癌細胞過表達PHLPP導致Akt活性降低,使得細胞凋亡增加。

另有研究發現PHLPP2在胰腺癌、慢性淋巴細胞白血病、乳腺癌、惡性膠質瘤、黑色素瘤等許多腫瘤中呈現低表達,并且惡性膠質瘤患者的PHLLP表達越高,其存活率也越高；有體外研究表明，過表達PHLPP2可抑制前列腺癌、膀胱癌和子宮內膜癌的腫瘤生長。雖然多項研究表明PHLPP2能夠抑制腫瘤發生、發展，但它是否在維生素C抑制胰腺癌的發生發展中發揮作用及作為維生素C治療胰腺癌的潛在生物標志物尚未明確。

基于現有技術的基礎與現狀，本申請的發明人擬提供一種用于預測維生素C治療胰腺癌療效的潛在生物標志物，具體涉及PHLPP2在制備維生素C治療胰腺癌預后標志物制劑中的應用。

發明內容

本發明的目的在于基于現有技術的基礎與現狀，針對維生素C治療胰腺癌缺乏有效的生物標志物的現狀，提供一種用于預測維生素C治療胰腺癌療效的潛在生物標志物，尤其涉及PHLPP2在制備維生素C治療胰腺癌預后標志物制劑中的應用。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：

一)細胞培養和試劑：

人胰腺癌癌細胞Capan-1和PANC-1購自中科院細胞庫。細胞培養于DMEM+10％FBS。維生素C購自Sigma公司，溶于1×PBS中。

二)定量PCR檢測PHLPP2 mRNA水平：

Trizol法提取細胞總RNA。利用購自翊圣公司的Hifair II 1st Strand cDNASynthesis SuperMix試劑盒將RNA反轉錄為cDNA。采用購自翊圣公司的SYBR Green Mix試劑盒對cDNA進行PCR擴增。將β-actin作為內參，ΔΔCT法分析基因轉錄水平。

三)細胞CCK8檢測：

胰腺癌細胞消化計數，10000個/孔鋪于96孔板中，培養24小時后加入不同濃度的維生素C培養48小時后，根據CCK8(購自Dijindo)試劑盒說明書進行檢測。