[發明專利]一種檀香高含量精油組織總RNA的提取方法有效
| 申請號： | 202010018542.7 | 申請日： | 2020-01-08 |
| 公開（公告）號： | CN111172154B | 公開（公告）日： | 2021-11-30 |
| 發明（設計）人： | 張新華;張婷;陳曉宏;鄭楓;曾宋君;馬國華 | 申請（專利權）人： | 中國科學院華南植物園 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001 | 代理人： | 劉明星;朱聰聰 |
| 地址： | 510650 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檀香 含量 精油 組織 rna 提取 方法 | ||
1.一種提取檀香高含量精油組織總RNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：a、取檀香木材組織在液氮中研磨成粉末，加入Tris-HCl提取液，每克組織加20 ml Tris-HCl提取液，-80°處理2 h；
b、4 ℃，3000 g，離心45 min，取上清；加入1/10上清液體積的3 M醋酸鈉，搖勻，再加入0.6倍體積的異丙醇，-20℃靜置2 h以上；
c、4 ℃、5000 g離心30 min；棄上清，沉淀中加入含10 mM Tris-HCl和1 mM EDTA 的TE緩沖液和5 M NaCl各4 ml，冰浴10-20 min，再加入2 ml 10% g/ml CTAB振蕩混勻；
d、加入等體積的體積比24：1氯仿/異戊醇抽提蛋白，4℃、10000g 15 min；將上清液轉入新離心管中，加入等體積氯仿/異戊醇重復2-3次；
e、上清液中加入1/4體積10 M LiCl過夜沉淀RNA；
f、4℃、14000g，離心30 min棄上清液，用體積分數70%的乙醇沖洗沉淀2次，4℃、14000g離心10 min，棄上清，室溫晾干沉淀，再用DEPC水充分溶解后-80°保存；
所述的Tris-HCl提取液為：100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA，50 mM十二烷基硫酸鋰，200mM氯化鋰，1% g/ml Tergitol Nonidet P-40，10 mM二硫蘇糖醇，2-3% g/ml 聚乙烯聚吡咯烷酮，pH 8.0；
所述的TE緩沖液為：10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 8.0；
所述的氯仿/異戊醇為體積比24∶1混合而成；醋酸鈉溶液為3 M的醋酸鈉溶液，pH5.2；
所述的檀香木材組織是檀香莖心材或根。
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