[發明專利]一種卡芬太尼和卡芬太尼代謝物的檢測方法

有效

• 申請號: 202010018215.1
• 申請日: 2020-01-08
• 公開（公告）號: CN111175395B
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發明（設計）人: 車津晶;原梅;朱小雨;張小差;劉作鋒
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/34;G01N30/86
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 趙曉琳

1.一種卡芬太尼和卡芬太尼代謝物的檢測方法，包括以下步驟：

(1)對尿液進行固相萃取，得到前處理樣品，所述固相萃取包括以下步驟：

(a)依次采用甲醇和磷酸鹽緩沖溶液對萃取柱進行活化平衡處理；所述磷酸鹽緩沖溶液的pH值為6，所述甲醇和磷酸鹽緩沖溶液的體積比為1:1；所述萃取柱為Waters OasisPRiME MCX柱；

(b)將待測樣品、磷酸鹽緩沖溶液和內標工作液混合，得到待測液，然后將待測液上樣；所述內標工作液為普萘洛爾水溶液，所述普萘洛爾水溶液的濃度為5μg/mL；

(c)依次采用甲酸水溶液和甲醇水溶液對萃取柱進行清洗，然后采用氨水和甲醇的混合溶液進行洗脫，得到洗脫液；

(d)將所述洗脫液濃縮后，再用甲醇水溶液復溶，離心取上清液，得到前處理樣品；

(2)將所述前處理樣品進行液相色譜-串聯質譜檢測，分別測試得到卡芬太尼峰面積和卡芬太尼代謝物峰面積，根據卡芬太尼濃度-峰面積標準曲線以及卡芬太尼代謝物濃度-峰面積標準曲線，得到待測樣品中卡芬太尼和卡芬太尼代謝物的質量含量；

所述卡芬太尼代謝物的結構如式II所示：

所述液相色譜-串聯質譜的色譜條件包括：

流動相包括流動相A和流動相B；所述流動相A為甲酸水溶液，所述甲酸水溶液中甲酸的體積分數為0.05～0.2％；所述流動相B為甲酸甲醇溶液，所述甲酸甲醇溶液中甲酸的體積分數為0.05～0.2％；色譜柱為CAPCELL PAK MGII C18色譜柱；色譜柱規格為2.0mm×50mm，3.0μm；色譜柱柱溫為25℃；色譜柱的進樣體積為10μL；所述色譜柱的流速為0.4mL/min；

洗脫方式采用梯度洗脫，所述梯度洗脫程序如表1所示：

表1梯度洗脫程序

所述液相色譜-串聯質譜的質譜條件包括：

采用三重四級桿串聯質譜；毛細管電壓3000～4000V；毛細管溫度為200～350℃；干燥氣流速為5～10L/min；霧化氣電壓20～30psi。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述待測樣品、磷酸鹽緩沖溶液和內標工作液的體積比為1:1:1。

3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟(c)甲酸水溶液中甲酸的體積分數為1～2％，所述甲醇水溶液中甲醇的體積分數為40～70％，所述氨水和甲醇的混合溶液中氨水的體積分數為1～10％；所述氨水的體積濃度為1～10％。

4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟(d)甲醇水溶液中甲醇的體積分數為5～20％。

5.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述卡芬太尼、卡芬太尼代謝物和內標物的質譜條件如表2所示：

表2質譜條件