[發明專利]一種腰果多肽及其提取方法和應用

有效

• 申請號: 202010017084.5
• 申請日: 2020-01-08
• 公開（公告）號: CN111138514B
• 公開（公告）日: 2023-09-22
• 發明（設計）人: 陳笛;曹獻英
• 申請（專利權）人: 海南大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/16;C12P21/06;A23L33/18;A61P37/08
• 代理公司: 重慶市信立達專利代理事務所(普通合伙) 50230
• 代理人: 陳炳萍

1.一種腰果多肽，其特征在于，腰果多肽的氨基酸序列為：IleIleAlaIleProAlaGlyValAlaHis。

2.權利要求1所述的一種腰果多肽的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1：脫脂處理

破碎新鮮腰果，按溶劑比1:6加入石油醚，常溫下連續攪拌處理4h，抽濾后40℃烘干后再破碎一次，60目過篩得到脫脂腰果粉；

S2：提取腰果蛋白

將步驟S1中的脫脂腰果粉與水按溶劑比1:40在40℃且pH為10的條件下處理2h，離心去除沉淀并得到上清液，調節上清液的pH至4.5后靜置30min，離心15min，收集沉淀，冷凍干燥得腰果蛋白；

S3：將步驟S2中得到的腰果蛋白用堿性蛋白酶酶切后，用沸水浴滅酶10min，5000r/min離心20min后取上清，冷凍干燥得粗腰果多肽粉；

S4：將步驟S3中得到的粗腰果多肽粉經3kDa超濾膜、葡聚糖凝膠層析柱和C18柱分離純化，冷凍干燥得腰果多肽；

步驟S3中，所述堿性蛋白酶是由地衣芽胞桿菌經發酵提煉而成的蛋白水解酶，主要成分為地衣芽胞桿菌蛋白酶，蛋白酶活為200000U/g，酶切時間為3-5h，溫度為35-65℃，pH為9-12.5，底物腰果蛋白的濃度為30-70g/L，堿性蛋白酶的加酶量為5％-8％；

步驟S4中，粗腰果多肽粉以超純水配制成濃度為100mg/mL的溶液，向Sephadex-G50凝膠層析柱上樣，上樣體積為1mL，紫外檢測器的波長設定為220nm，Sephadex?G-50凝膠柱層析分離后收集得到了兩個組分F1-a和F1-b；

稱取適量分離純化得到的F1-a多肽，用含0.1％三氟乙酸的超純水溶解，用C18柱純化，上樣濃度為100mg/mL，并用0.45μm濾膜過濾，所用色譜條件如下：

色譜柱：ODS?HYPERSIL制備柱，型號為5um,250×10mm；

上樣量：1mL；

流速：0.8mL/min；

紫外檢測器：檢測波長220nm；

流動相A：含0.05％TFA的乙腈；流動相B：含0.05％TFA的超純水；

梯度洗脫：0～15min，0～30％的有機相A、15～25min，30～35％的有機相A、25～40min，35～40％的有機相A。

3.根據權利要求2所述的一種腰果多肽的制備方法，其特征在于，步驟S3中的酶切條件如下：酶切時間為5h，溫度為42.5℃，pH為11.5，底物腰果蛋白的濃度為40g/L，堿性蛋白酶的加酶量為8％。

4.權利要求1所述的一種腰果多肽在制備抗過敏藥品中的應用。