[發明專利]一種液相色譜串聯質譜檢測血漿兒茶酚胺及其代謝物的方法

有效

• 申請號: 202010016762.6
• 申請日: 2020-01-08
• 公開（公告）號: CN111175394B
• 公開（公告）日: 2023-08-04
• 發明（設計）人: 周洲;王愷雋;趙麗平;武紅梅;陸開智;肖冰心;潘媛媛;李彩霞;何啟新;倪偉;栗琳
• 申請（專利權）人: 北京豪思生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/54;G01N30/60
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 吳歡燕

本發明屬于臨床生物樣本檢測技術領域，具體涉及血漿中兒茶酚胺及其代謝物檢測技術，特別涉及高通量液相色譜串聯質譜法檢測兒茶酚胺及其代謝物(腎上腺素、去甲腎上腺素、多巴胺、甲氧基腎上腺素、甲氧基去甲腎上腺素、3?甲氧基酪胺)的方法。所述方法包括：標準溶液配制、樣本處理、樣本檢測以及計算公式。該方法可以同時檢測兒茶酚胺及其代謝物共6種物質，具有高準確度、高靈敏度、高特異性以及所需樣本體積少、樣本前處理簡單及耐受性好等優點。

技術領域

本發明涉及高通量液相色譜串聯質譜的檢測方法以及高通量液相色譜串聯質譜法檢測兒茶酚胺及其代謝物的方法。

背景技術

兒茶酚胺是一種含有兒茶酚和胺基的神經類物質，包括腎上腺素(epinephrine，E)、去甲腎上腺素(norepinephrine，NE)、多巴胺(dopamine，DA)，是由腎上腺髓質和一些交感神經元嗜鉻細胞分泌的一類非常重要的神經遞質，也是重要的激素物質。這三種兒茶酚胺都是由酪氨酸為前提轉化得到的，在體內兒茶酚胺物質代謝后，被轉變成相應的代謝產物如甲氧基腎上腺素(或變腎上腺素，Metanephrine，MN)、甲氧基去甲腎上腺素(或去甲變腎上腺素，Normetaneprine，NMN)、3-甲氧基酪胺(3-methoxytyramine)等。

兒茶酚胺及其代謝物在人體的心血管系統、神經系統、內分泌腺、腎臟、平滑肌等組織系統的生理活動中起著廣泛的調節作用，同時還影響人體的代謝。甲氧腎上腺素及甲氧基去甲腎上腺素為腎上腺素及去甲腎上腺素的中間產物，特別地，被公認為是臨床上診斷嗜鉻細胞瘤的黃金標準，檢測靈敏度和特異度均高于90％；神經母細胞瘤患者體內可同時分泌過量的腎上腺素、去甲腎上腺素以及多巴胺，因此同時檢測兒茶酚胺代謝物，不僅可以間接反映體內兒茶酚胺的代謝情況，而且對嗜鉻細胞瘤、神經母細胞瘤等中樞神經系統疾病的早期診斷及鑒別有重要意義。

目前杭州佰辰醫學檢驗所有限公司于2016年申請了專利號：201610907368.5，發明名稱“一種利用液相色譜串聯質譜檢測血漿中兒茶酚胺的方法”。該發明公開了一種利用液相色譜串聯質譜檢測血漿中兒茶酚胺的方法。本發明的方法用丹磺酰氯進行衍生化反應，提取后使用液相色譜串聯三重四級桿質譜儀檢測，同時定量血漿中包括多巴胺，腎上腺素，去甲腎上腺素的3種兒茶酚胺。但是僅能檢測3種代謝產物，且樣本處理步驟復雜，耗時長，不利于臨床推廣。廣東中科康儀生物技術有限公司于2017年11月7日申請的中國專利“一種用液相色譜串聯質譜技術檢測兒茶酚胺及代謝產物的方法”，申請號CN201711081600.5，該發明公開一種用液相色譜串聯質譜技術檢測兒茶酚胺及代謝產物的方法，該方法可以高靈敏度地、特異性地一次性檢測出兒茶酚胺及其代謝產物，包括MN和NMN、E和NE以及DA和3-MT，可以用于各種類型的PPGL進行診斷，但是有多個指標的最低定量限高于正常參考閾值，較多樣本會出現檢測不出的情況，并引起臨床誤判。

綜上所述，現有技術中關于兒茶酚胺類物質檢測的過程主要缺陷在于：一、兒茶酚胺類物質在血漿中含量低，對檢測方法及儀器要求較高；二、兒茶酚胺類物質極性大，色譜柱保留困難，常用衍生化方法進行樣本前處理，但其他操作復雜，不利于臨床推廣；三、一次檢測6種兒茶酚胺類物質難度大，目前公開的多數方法只檢測其中一部分物質。

發明內容

為了解決上述問題，本發明公開了一種靈敏度更高的液相色譜串聯質譜儀檢測兒茶酚胺及代謝物的方法。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的。

(一)標準溶液的配制。