[發(fā)明專利]一種腺病毒二價(jià)疫苗

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010016395.X
• 申請(qǐng)日: 2020-01-08
• 公開（公告）號(hào): CN111166875A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳凌;楊臣臣;劉曉琳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州恩寶生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): A61K39/235
• 分類號(hào): A61K39/235;A61K39/295;A61P31/20
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 鄭瑩

本發(fā)明公開了一種腺病毒二價(jià)疫苗，其包括復(fù)制缺陷型人4型腺病毒和復(fù)制缺陷型人7型腺病毒。所述復(fù)制缺陷型人4型腺病毒、7型腺病毒的E1、E3基因缺失，E4基因的部分編碼框置換為人5型腺病毒E4基因的相應(yīng)編碼框。本發(fā)明的腺病毒二價(jià)疫苗能夠有效刺激機(jī)體產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答，產(chǎn)生高效價(jià)的特異性中和抗體，用于預(yù)防病原體的感染。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于病毒免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種腺病毒二價(jià)疫苗。

背景技術(shù)

腺病毒(Adenovirus，Ad)是雙鏈DNA病毒，其基因組長(zhǎng)度約35-40kb。已知人腺病毒分為7個(gè)亞群(A～G)，包括50多個(gè)血清型(90多個(gè)基因型)，患者感染后主要引起急性呼吸道疾病(腺病毒B和C亞群)、結(jié)膜炎(腺病毒B和D亞群)和胃腸炎(腺病毒F亞群41型和42型，G亞群52型)。腺病毒導(dǎo)致的呼吸道感染多由腺病毒3型、4型和7型引起。Ad4和Ad7主要集中在部隊(duì)、學(xué)校等青年和青少年聚集的地方爆發(fā)，甚至導(dǎo)致病人的死亡。但是，尚無治療腺病毒感染的特效藥物，臨床上只能采取支持性治療。

目前，預(yù)防腺病毒感染的疫苗僅在美國(guó)軍隊(duì)獲得使用。該疫苗為野生型Ad4、Ad7在人胚腎二倍體成纖維細(xì)胞上傳代，經(jīng)冷凍脫水、混和纖維素乳糖等制成的腸溶型膠囊形式的口服活病毒疫苗。該疫苗的使用有效控制了美軍腺病毒感染疫情的爆發(fā)。但是，美軍使用的Ad4和Ad7苗存在極大的風(fēng)險(xiǎn)，該疫苗主要是低劑量野生型腺病毒，存在殘余活病毒從腸道排出后污染生活環(huán)境的風(fēng)險(xiǎn)，極易造成病毒的二次污染，安全性較差，因而不能廣泛應(yīng)用于普通人群。所以，研制安全性高并能預(yù)防Ad4和Ad7強(qiáng)病毒株的復(fù)制缺陷型腺病毒疫苗是十分必要的。

復(fù)制缺陷型腺病毒載體已經(jīng)被廣泛的應(yīng)用于疫苗研發(fā)、基因治療等領(lǐng)域，其不僅安全性好，并且在生物體內(nèi)又發(fā)生較強(qiáng)的免疫反應(yīng)。已有研究顯示，腺病毒E1基因是其復(fù)制增殖的必需基因，E3基因在抵抗宿主的免疫系統(tǒng)中起關(guān)鍵性作用。敲除E1、E3基因后，腺病毒在正常人體內(nèi)喪失復(fù)制能力，在此方面具有減毒表型。同時(shí)，Ad4和Ad7主要的表面抗原Hexon、Fiber等則不受影響，不會(huì)影響疫苗的免疫原性。因此，采用復(fù)制缺陷的腺病毒作為疫苗可有效增加疫苗的全性和使用范圍。復(fù)制缺陷型腺病毒可在互補(bǔ)細(xì)胞株，如表達(dá)Ad5E1基因的293細(xì)胞、PerC6細(xì)胞中生產(chǎn)。但是，研究發(fā)現(xiàn)很多腺病毒，尤其是非C亞群腺病毒，敲除E1、E3基因后在這些生產(chǎn)細(xì)胞株中產(chǎn)量較低，其主要原因是Ad5 E1B 55K不能與B亞型腺病毒E4 Orf6蛋白產(chǎn)生相互作用，不能有效抑制宿主細(xì)胞mRNA的出核，不能提升病毒晚期蛋白的表達(dá)。這些腺病毒需要表達(dá)相應(yīng)E1基因的293細(xì)胞株或其他細(xì)胞株才能生產(chǎn)。因此，僅敲除E1、E3基因的復(fù)制缺陷型Ad3、Ad4和Ad7在疫苗生產(chǎn)細(xì)胞株293或PerC6種難以生產(chǎn)。提升其在這些細(xì)胞株中的生產(chǎn)能力是當(dāng)前需要解決的瓶頸技術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于為了克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種可在疫苗生產(chǎn)細(xì)胞株中大規(guī)模擴(kuò)增的復(fù)制缺陷型重組Ad4和Ad7的制備方法和應(yīng)用，及復(fù)制缺陷型重組Ad4和Ad7以一定的比例混合制備Ad4和Ad7二價(jià)疫苗，免疫機(jī)體可以有效刺激機(jī)體產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)，產(chǎn)生特異性Ad4和Ad7中和抗體，用于預(yù)防Ad4和Ad7的病原體的感染。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

一種組合物，其包括復(fù)制缺陷型人4型腺病毒和7型腺病毒。

作為優(yōu)選地，所述復(fù)制缺陷型4型腺病毒的E1、E3基因缺失，E4基因的部分編碼框置換為人5型腺病毒E4基因的相應(yīng)編碼框。

作為優(yōu)選地，所述E4基因的編碼框包括Orf2、Orf 3、Orf 4和Orf6編碼框。

作為優(yōu)選地，所述復(fù)制缺陷型人7型腺病毒的E1、E3基因缺失，E4基因的部分編碼框置換為人5型腺病毒E4基因的相應(yīng)編碼框。

作為優(yōu)選地，所述E4基因的編碼框包括Orf2、Orf 3、Orf 4和Orf6編碼框。