[發(fā)明專利]一種蜂膠提取物中總黃酮含量的測定方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010015163.2
• 申請日: 2020-01-07
• 公開（公告）號: CN111077253A
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬毅;廖健;鄧婉婷
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東毅明檢測科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 廣州市智遠(yuǎn)創(chuàng)達(dá)專利代理有限公司 44619
• 代理人: 王會龍

1.一種蜂膠提取物中總黃酮含量的測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一：準(zhǔn)備實驗儀器；

步驟二：準(zhǔn)備待試材料；

步驟三：選擇色譜條件；

步驟四：制備所需溶液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蜂膠提取物中總黃酮含量的測定方法，其特征在于，所述步驟一中需準(zhǔn)備以下儀器：高效液相色譜儀、精密天平、50mL燒杯、玻璃棒、稱量紙、10mL容量瓶、50mL容量瓶、注射器、洗瓶。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蜂膠提取物中總黃酮含量的測定方法，其特征在于，所述步驟二中需準(zhǔn)備蜂膠提取物。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蜂膠提取物中總黃酮含量的測定方法，其特征在于，所述步驟三中需將儀器調(diào)整至適合條件方可進(jìn)行實驗，具體條件如下：

色譜柱：C18柱(250×4.6mm,5μm)；

流動相：水：甲醇(25：75)；

流速：1mL/min；

檢測波長：276nm；

柱溫：30℃；

進(jìn)樣量：15μL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蜂膠提取物中總黃酮含量的測定方法，其特征在于，所述步驟四中制備所需溶液還包括以下步驟：

a：制備對照品溶液；

b：制備供試品溶液；

c：制備陰性樣品溶液；

d：專屬性試驗；

e：線性關(guān)系考察；

f：精密量試驗；

g：穩(wěn)定性試驗；

h：重復(fù)性試驗；

i：耐用性試驗；

j：加樣回收率試驗；

k：樣品含量測定。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種蜂膠提取物中總黃酮含量的測定方法，其特征在于，所述制備對照品溶液具體包括：精密稱取蜂膠提取物中總黃酮對照品50mg置于50ml量瓶中，用甲醇溶液溶解并定容，搖勻，即得1mg/ml的對照品儲備液。精密量取該對照品儲備液2.5ml，置于25ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；

所述制備供試品溶液具體包括：精密稱取蜂膠提取物中總黃酮對照品1mg置于50ml量瓶中，用甲醇溶液溶解并定容，搖勻，即得1mg/ml的供試品儲備液。精密量取該對照品儲備液1ml，按供試品溶液制備方法制備，即得；

所述制備陰性樣品溶液具體包括：制備不含總黃酮的蜂膠提取物的陰性樣品溶液，精密量取該溶液1ml，按供試品溶液制備方法制備，即得；

所述專屬性試驗具體包括：取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液，按照上述色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，觀察色譜圖記錄總黃酮鋒于那個時間點(diǎn)左右出鋒，且鋒形較好，且輔料無干擾；

所述線性關(guān)系考察具體包括：精密量取對照品儲備液3、4、5、6、7、8ml置于50ml量瓶中，加流動相并稀釋至刻度，搖勻，作為供試液。按上述色譜條件精密量取上述供試液10μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，以鋒面積(Y)對濃度(X，μg/ml)做線性回歸，得出相應(yīng)的回歸方程，并通過觀察色譜圖找出總黃酮在什么范圍內(nèi)與其鋒面積呈良好的線性關(guān)系；

所述精密度試驗具體包括：精密量取對照品溶液適量，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄鋒面積并計算RSD，當(dāng)RSD數(shù)值小于2％時，表示儀器精密度良好；

所述穩(wěn)定性試驗具體包括：精密量取供試品溶液適量，分別于制備后0,2,4,6,8,10,12,14,16,18,20,22,24h進(jìn)樣測定，如若蜂膠提取物中總黃酮鋒面積在24h內(nèi)基本不變，且RSD數(shù)值小于2％時，表明儀器的穩(wěn)定性良好；

所述重復(fù)性試驗具體包括：精密量取蜂膠提取物溶液適量，按上述b步驟中的方法平行制備6份供試品溶液，進(jìn)樣測定，計算得出蜂膠提取物中總黃酮含量與RSD數(shù)值，當(dāng)RSD數(shù)值小于2％時表明方法重復(fù)性較好；

所述耐用性試驗具體包括：為考察測定條件變化對測定結(jié)果的影響，擬定在下列色譜條件微調(diào)下進(jìn)行試驗：

(1)改變流速±0.2ml/min：0.8,1.0,1.2ml/min；

(2)改變流動相對比±5％：甲醇：水＝77:23；甲醇：水＝75:25；甲醇：水＝73:27；

(3)改變色譜柱：EclipseXDB-C18；ZORBAXSB-C18；Eclipse Plus-C18；

各條件下取上述供試液10μl注入色譜儀，記錄色譜圖，計算含量RSD數(shù)值，如若所有的RSD數(shù)值均小于2％，則表示次方法耐用性良好；

所述加樣回收率試樣具體包括：精密量取蜂膠提取物溶液0.5ml共6份，分別精密加入對照品約120mg，按上述b步驟方法制備供試品溶液；按權(quán)要4中的色譜條件進(jìn)樣分析，計算回收率與RSD數(shù)值，如若RSD數(shù)值小于2％時，表明本方法精準(zhǔn)度良好；

所述樣品含量測定具體包括：取3批樣品，按b步驟下的方法配制供試品溶液，按權(quán)要4中的色譜條件，精密量取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以鋒面積計算含量。