[發明專利]石蒜屬植物熒光EST-SSR分子標記及其應用

有效

• 申請號: 202010013682.5
• 申請日: 2020-01-07
• 公開（公告）號: CN111118194B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發明（設計）人: 李青竹;蔡友銘;張永春;楊柳燕;許俊旭;孫翊;李心;周曉慧;王楨
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 瞿曉晶

1.一種檢測石蒜屬植物熒光EST-SSR分子標記來鑒別石蒜種的方法，所述方法包括進行PCR反應，PCR反應后，采用毛細管電泳法進行熒光檢測；所述PCR的引物為如SEQ ID NO.5所示核苷酸序列5’端標記HEX的正向引物QZ209 F和如SEQ ID NO.6所示核苷酸序列的反向引物QZ209 R；所述石蒜種為12個，包括長筒石蒜、黃長筒石蒜、中國石蒜、石蒜、玫瑰石蒜、紅藍石蒜、湖北石蒜、乳白石蒜、陜西石蒜、換錦花、香石蒜和短蕊石蒜。

2.一種檢測一組石蒜屬植物熒光EST-SSR分子標記來鑒別石蒜種的方法，所述方法包括進行PCR反應，PCR反應后，采用毛細管電泳法進行檢測；所述PCR的引物由：

如SEQ ID NO.5所示核苷酸序列5’端標記HEX的正向引物QZ209 F和如SEQ ID NO.6所示核苷酸序列的反向引物QZ209 R；

如SEQ ID NO.7所示核苷酸序列5’端標記HEX的正向引物QZ155 F和如SEQ ID NO.8所示核苷酸序列的反向引物QZ155 R；

如SEQ ID NO.9所示核苷酸序列5’端標記FAM的正向引物QZ175 F和如SEQ ID NO.10所示核苷酸序列的反向引物QZ175 R；

和如SEQ ID NO.11所示核苷酸序列5’端標記HEX的正向引物QZ171 F和如SEQ IDNO.12所示核苷酸序列的反向引物QZ171 R組成；

所述石蒜種為16個，包括長筒石蒜、黃長筒石蒜、忽地笑、中國石蒜、石蒜、玫瑰石蒜、紅藍石蒜、湖北石蒜、稻草石蒜、粉稻草石蒜、乳白石蒜、陜西石蒜、換錦花、鹿蔥、香石蒜和短蕊石蒜。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述鑒別的PCR反應體系每25μL包括：基因組DNA 1~5μL，3~4 pmol正向引物和反向引物各0.5μL，10 mM dNTP 0.5μL，10×PCRBuffer 2.5μL，25 mM MgCl₂ 2μL，5UμL^-1 Taq 酶0.2μL，加ddH₂O補足25μL；

PCR程序為：95℃預變性3 min；95℃變性30 s，55~60℃退火30 s，72℃延伸30 s，10個循環；95℃變性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸30 s，10個循環；72℃延伸6 min，4℃保存。