[發明專利]使用流式細胞儀檢測熒光素酶標記細胞的方法有效
| 申請號： | 202010013013.8 | 申請日： | 2020-01-06 |
| 公開（公告）號： | CN111157434B | 公開（公告）日： | 2021-01-01 |
| 發明（設計）人： | 王方芳;黃菁草;楊艷;范慶超 | 申請（專利權）人： | 四川大學華西醫院 |
| 主分類號： | G01N15/14 | 分類號： | G01N15/14 |
| 代理公司： | 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222 | 代理人： | 李高峽;張娟 |
| 地址： | 610000 四*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 使用 細胞 檢測 熒光 標記 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種使用流式細胞儀檢測熒光素酶標記細胞的方法，用于判斷熒光素酶是否在細胞中表達，其特征在于：
它包括如下步驟：將帶有熒光素酶基因的細胞與熒光素鹽共同孵育1~10min后，使用流式細胞儀488nm波長激發光激發熒光，用第二通道接收發射熒光，最后經處理得到熒光信號，使用流式細胞儀檢測細胞中的熒光素酶與作為底物的所述熒光素鹽反應的發光信號；
所述第二通道的帶通濾光片能接受515nm-544nm波長范圍的發射熒光；
它還包括如下步驟：
1）將不帶有熒光素酶基因的細胞與熒光素鹽共同孵育1~10min后，使用流式細胞儀488nm波長激發光激發熒光，用第二通道檢測熒光信號，作為陰性對照；
2）將帶有熒光素酶基因的細胞直接用流式細胞儀檢測，使用的激發光波長為488nm，用第二通道檢測熒光信號，作為空白對照。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：熒光素鹽濃度為2.25~3.75mg/mL。
3.如權利要求2所述的方法，其特征在于：細胞密度是（10~50）×104個/mL。
4.如權利要求1~3任一所述的方法，其特征在于：所述細胞為腫瘤細胞。
5.如權利要求1~3任一所述的方法，其特征在于：所述細胞為干細胞。
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