[發(fā)明專利]一種擴(kuò)增靶核酸的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010012269.7
• 申請(qǐng)日: 2014-11-26
• 公開（公告）號(hào): CN111100911B
• 公開（公告）日: 2023-06-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周小川;朱奇;張小林;盛苨晶
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州聯(lián)川基因診斷技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/686
• 分類號(hào): C12Q1/686
• 代理公司: 杭州信與義專利代理有限公司 33450
• 代理人: 萬景旺

1.一種擴(kuò)增六個(gè)不同的靶核酸的方法，該方法包括：

提供六組特異性引物對(duì)，其中每對(duì)包括第一特異性引物和第二特異性引物，且專為特定靶核酸設(shè)計(jì)，第一通用引物、第二通用引物和一組靶核酸、聚合酶和核苷酸；

進(jìn)行兩輪第一熱循環(huán)過程，該過程包括包括變性步驟、退火步驟和延伸步驟；以及

進(jìn)行兩輪或多輪第二熱循環(huán)過程，該過程包括變性步驟、退火步驟和延伸步驟，從而擴(kuò)增靶核酸，

其中，第一組特異性引物對(duì)的第一特異性引物和第二特異性引物的核苷酸序列分別如SEQ?ID?No.5和SEQ?ID?No.6所示；第二組特異性引物對(duì)的第一特異性引物和第二特異性引物的核苷酸序列分別如SEQ?ID?No.7和SEQ?ID?No.8所示；第三組特異性引物對(duì)的第一特異性引物和第二特異性引物的核苷酸序列分別如SEQ?ID?No.9和SEQ?ID?No.10所示；第四組特異性引物對(duì)的第一特異性引物和第二特異性引物的核苷酸序列分別如SEQ?ID?No.11和SEQ?ID?No.12所示；第五組特異性引物對(duì)的第一特異性引物和第二特異性引物的核苷酸序列分別如SEQ?ID?No.13和SEQ?ID?No.14所示；第六組特異性引物對(duì)的第一特異性引物和第二特異性引物的核苷酸序列分別如SEQ?ID?No.15和SEQ?ID?No.16所示；所述第一通用引物和第二通用引物的核苷酸序列分別如SEQ?ID?No.3和SEQ?ID?No.4所示。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中第一特異性引物和第二特異性引物的濃度比第一通用引物和第二通用引物濃度小500倍。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中第一特異性引物和第二特異性引物的濃度為0.0001nM到5nM。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中第一通用引物和第二通用引物的濃度為200nM到5000nM。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中第一特異性引物和第二特異性引物的濃度小于1nM。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中第一通用引物和第二通用引物的濃度大于200nM。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中第一熱循環(huán)過程的退火時(shí)間為30分鐘到4小時(shí)。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中第一熱循環(huán)過程的退火溫度為60℃到75℃。

9.如權(quán)利要求1所述的方法，其中第一熱循環(huán)過程的退火溫度為60℃到72℃。

10.如權(quán)利要求1所述的方法，其中第一熱循環(huán)過程的退火溫度為65℃到72℃。

11.如權(quán)利要求1所述的方法，其中第二熱循環(huán)過程有10-50個(gè)循環(huán)。

12.如權(quán)利要求1所述的方法，其中第二熱循環(huán)過程有20-40個(gè)循環(huán)。

13.如權(quán)利要求1所述的方法，其中聚合酶是無鏈置換活性和5'到3'核酸酶活性的聚合酶。