[發明專利]一種增強透明質酸保濕功效的方法

在審

• 申請號: 202010011947.8
• 申請日: 2020-01-07
• 公開（公告）號: CN111000755A
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發明（設計）人: 金雪坤;張蘭英;劉彥彥
• 申請（專利權）人: 北京沐恩瑞生物科技有限公司
• 主分類號: A61K8/73
• 分類號: A61K8/73;A61K8/99;A61Q19/00;C12N5/0775
• 代理公司: 北京中慧創科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11721
• 代理人: 由元

1.一種增強透明質酸保濕功效的方法，其特征在于，包括：

將透明質酸按如下組成配制成組合物A：丁二醇 3-8份、甘油2-6份、透明質酸小分子0.1-0.5份、透明質酸中分子 0.1-0.5份、透明質酸大分子0.1-0.5份、戊二醇 1-5份甜菜堿0.5-3份，余量為水，所述組合物A合計為100份。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述組合物A按如下組成配制：丁二醇 5份、甘油 4份、透明質酸小分子 0.2份、透明質酸中分子 0.1份、透明質酸大分子 0.2份、戊二醇 2份、甜菜堿 1.5份，余量為水，所述組合物A合計為100份。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述透明質酸小分子的分子量為5600。

4.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述透明質酸中分子的分子量為26萬。

5.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述透明質酸大分子的分子量為130萬。

6.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法還包括，將所述組合物A與衍生液按照體積比為1：（0.5-3）配制成混合物B。

7.根據權利要求1-6任一項所述的方法，其特征在于，所述衍生液為脂肪間充質干細胞培養上清液。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述衍生液的制備方法，包括以下步驟：

1） 在無菌條件下采集脂肪組織，置于培養瓶中；

2） 用與所述脂肪組織等體積的磷酸鹽緩沖溶液沖洗三次以除去紅細胞；

3） 將I型膠原蛋白酶加入到培養瓶中，使所述I型膠原蛋白酶作用于已經沖洗干凈的所述脂肪組織，在37℃的條件下進行消化30-60min；

4） 將步驟3）消化后的產物經過離心，使脂肪和溶液體系發生分層，吸棄上層脂肪，再加入磷酸鹽緩沖溶液重懸細胞；

5） 在1200rpm/min的條件下離心，使細胞沉淀，吸走上清液，再用間充質干細胞完全培養基重懸；

6） 將步驟5）重懸后得到的細胞于37℃、二氧化碳濃度為5%的二氧化碳培養箱中培養，每2-3天換液，吸走之前的培養基，換上新鮮的培養基，待細胞融合度達到80%-90%，得到P0代細胞；

當P0代細胞達到90%以上融合時，用質量體積比濃度為0.25%的胰酶消化所述P0代細胞，按1：（3-5）的比例進行傳代，獲得P1代細胞，依次進行傳代獲得P2-P6脂肪間充質干細胞；

將獲取的P2-P6脂肪間充質干細胞在10cm培養皿中培養，培養條件為：培養箱的溫度設置為37℃、二氧化碳濃度為5%，當生長到80%-90%的匯合度時，收集培養上清液，在低溫離心機設置為4℃的條件下，設置為2000g、離心10分鐘，取上清液，過0.22um濾膜，獲得的細胞培養上清液為條件培養基，將所述條件培養基放于冰箱中，在4℃條件下儲存備用，即得所述衍生液。