[發明專利]一株巨大芽孢桿菌及其應用

有效

• 申請號: 202010010082.3
• 申請日: 2020-01-06
• 公開（公告）號: CN111172066B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 孫利鵬;管寧;陳曉宇;梁穎杰;郭蒙恩;鄒瑞瑞;艾超峰
• 申請（專利權）人: 河南新仰韶生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N13/00;C02F3/34;A01G22/45;A01G7/06;C12R1/11
• 代理公司: 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104
• 代理人: 張曉萍

本發明屬于生物發酵工程技術領域，具體涉及一株巨大芽孢桿菌及其應用專利申請。巨大芽孢桿菌YSJ3,該菌株于2019年12月5日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，保藏編號為CGMCC 19088。本申請中，發明人在現有巨大芽孢桿菌YSJ1菌株基礎上，通過紫外誘變和等離子束誘變技術的組合應用及定向篩選育種，最終獲得了一株具有較好生長活力的巨大芽孢桿菌YSJ3菌株。初步實驗結果表明，YSJ3菌株最高發酵活力可達150億/mL以上，表現出較好生長效果，可為巨大芽孢桿菌微生物制劑產品的制備奠定良好的技術基礎。

技術領域

本發明屬于生物發酵工程技術領域，具體涉及一株巨大芽孢桿菌及其應用專利申請。

背景技術

巨大芽孢桿菌（Bacillus megaterium），是一種好氧、產芽孢的革蘭氏陽性細菌，菌體直徑大于 1.0μm，俗稱“大芽孢”菌，是一種有益的土壤細菌，現有研究認為該菌對于促進作物生產、改善作物品質具有較好用處。因此近年來對于該菌的研究和應用得到了一定程度重視。但受限于現有該菌生長活力較弱、生長速度較慢、發酵產量較低等制約，限制了以該菌為主的微生物制劑的生產應用。因而極有必要篩選具有更好生長效果的巨大芽孢桿菌菌株以及對該菌株的發酵工藝進行進一步優化，從而為相關微生物制劑產品的生產應用奠定技術基礎。

發明內容

基于現有巨大芽孢桿菌，通過對其誘變、篩選，本申請目的在于提供一株具有更好生長活力的巨大芽孢桿菌，從而為相關生物有機肥、微生物制劑、抗生素合成以及酶工業生產應用奠定一定技術基礎。

本申請所采取的技術方案詳述如下。

一株巨大芽孢桿菌，其具體名稱為：巨大芽孢桿菌（Bacillus megaterium）YSJ3,該菌株已于 2019 年 12 月5日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，保藏編號為CGMCC19088；

該菌株是通過對原始出發菌株巨大芽孢桿菌YSJ1進行多次紫外誘變和等離子束復合誘變育種選育獲得的。

利用所述巨大芽孢桿菌所制備發酵產物，通過如下步驟制備獲得：

（1）菌株活化和制備種子液

將所保存的巨大芽孢桿菌YSJ3菌株在LB平板培養基中，37℃活化培養24h后，收集菌苔轉接于LB液體培養基中進一步擴增后，轉接于種子罐的種子培養基中，37℃、180-300rpm發酵 15h左右作為種子液；

所述種子培養基為（質量百分比）：葡萄糖2%，玉米粉 3％，豆餅粉5％，玉米漿干粉1%，磷酸二氫鉀0.2％，酵母粉1.5%，pH7.0；

（2）制備發酵液

按照10%體積比接種量，將步驟（1）中所制備種子液轉接于發酵培養基中，在發酵罐內， 30~38℃、180-200rpm發酵至 24~48h 制備發酵液（37℃、180-200rpm發酵至 30h 左右至芽孢形成率在80%以上，同時發酵液的pH明顯升高時即可放罐）；

為便于后續制備微生物制劑成品，可在發酵醪液中加入2%質量分數的無水硫酸鈉充分攪拌均勻后進一步轉入乳化罐中，噴霧干燥處理（具體噴霧干燥處理工藝參考參數為：進風溫度控制在：140-170℃，排風溫度控制在60-65℃，負壓200-500pa），進一步制備成粉末狀原粉，并與其他輔料或有效成分復配后作為巨大芽孢桿菌成品制劑；

所述發酵培養基，為液態，以質量百分比計，具體成分包括：玉米粉 5~8%，豆餅粉9~12%，麩皮 0.5~1.5％，氯化鈣 0.03％，磷酸二氫鉀0.1~0.5%，硫酸錳0.01~0.03%，pH 6.5~7.2。