[發明專利]黃芩解毒散中添加多種藥物的UPLC-MS/MS檢測方法

有效

• 申請號: 202010009928.1
• 申請日: 2020-01-06
• 公開（公告）號: CN111157649B
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 魏秀麗;張傳津;劉霄飛;楊志昆;徐恩民;楊林;張志民
• 申請（專利權）人: 山東省獸藥質量檢驗所（山東省畜產品質量檢測中心）
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 北京智橋聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 11560
• 代理人: 洪余節

本發明涉及黃芩解毒散中添加多種藥物的UPLC?MS/MS檢測方法，屬于中藥中添加藥物的檢測方法技術領域。本發明中超高液相色譜條件為：采用AB 4000 Q TRAP液質，電噴霧離子源，正離子掃描，waters BEH C18色譜柱(2.1mm*50mm*1.8um)，流速0.3ml/min，進樣量5ul。流動相：A:乙腈(0.1％甲酸)；B:水(0.1％甲酸)；串聯質譜優選母離子和子離子，并調諧其質譜參數，本發明通過母離子和特定的子離子碎片，作為不同的化合物的身份特征，具有唯一性和專屬性，而且靈敏度是液相色譜法的百分之一至千分之一，檢出限低。

技術領域

本發明涉及黃芩解毒散中添加多種藥物的UPLC-MS/MS檢測方法，屬于中藥中添加藥物的檢測方法技術領域。

背景技術

黃芩解毒散是獸醫常見的一種中藥散劑，因為具有清熱解毒、澀腸止瀉的功效，經常用于仔豬腹瀉和及大腸桿菌病等的臨床治療。

黃芩解毒散來自于2009年農業部第1295號公告批準為三類新獸藥，由于過了監測保護期，各家獸藥企業都可以進行申報。組方成分有黃芩500克地錦草400克，女貞子220克，鐵莧菜400克，老鶴草400克，玄參100克，地榆200克，金櫻子200克。

磺胺二甲嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺間甲氧嘧啶、培氟沙星、金剛烷胺、恩諾沙星、沙拉沙星、環丙沙星、甲磺酸達氟沙星都是化工制藥，具有抗菌或抗病毒的作用，在一定程度上，可以增強黃芩解毒散的治療效果，會被用來非法添加。

由于黃芩解毒散檢測方法是薄層鑒別和液相測定黃芩苷的含量，由于中藥組份多成分復雜，很難檢測到非法添加物的存在，常被不法獸藥企業，作為非法添加藥物，增強治療效果的一種中獸藥。

發明內容

本發明針對上述問題，提供了一種黃芩解毒散中添加多種藥物的UPLC-MS/MS檢測方法。本發明突破顯微鑒別和薄層鑒別的缺陷，采用超高效液相色譜-串聯質譜(UPLC-MS/MS)，通過優選母離子和子離子，并調諧其質譜參數，能定性和定量的檢測磺胺二甲嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺間甲氧嘧啶、培氟沙星、金剛烷胺、恩諾沙星、沙拉沙星、環丙沙星和甲磺酸達氟沙星九種非法添加藥物。本發明技術方案如下：

黃芩解毒散中添加多種藥物的UPLC-MS/MS檢測方法，具體步驟如下：

(1)樣品處理方法，取陰性黃芩解毒散100mg，至15mL離心管中，加入10ml乙腈和水(0.2％甲酸，體積百分數)的混合液，期中乙腈與水(0.2％甲酸)的體積比為8:2，超聲半小時，離心8000rpm/min，5分鐘，取上清液通過0.22um有機濾膜過濾，從濾液中取0.2mL，用初始流動相加至10mL，再取0.1mL，用初始流動相加至10mL，得基質匹配空白溶液；陽性樣品同法處理，上機測試；

(2)分別取九種藥物磺胺二甲嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺間甲氧嘧啶、培氟沙星、金剛烷胺、恩諾沙星、沙拉沙星、環丙沙星、甲磺酸達氟沙星對照品各10mg，用乙腈分別配置成0.1mg/mL的儲備液，用基質空白溶液倍比稀釋，配置成50ng/ml、20ng/ml、10ng/ml、5ng/ml、2ng/ml，上機測試；

(3)以0.2％、0.5％、1％(質量百分數)的濃度在5g黃芩解毒散劑中添加磺胺二甲嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺間甲氧嘧啶、培氟沙星、金剛烷胺、恩諾沙星、沙拉沙星、環丙沙星、甲磺酸達氟沙星9種藥物，充分混勻；樣品處理過程同陰性樣品；

(4)超高液相色譜條件為：采用AB 4000Q TRAP液質，waters BEH C18色譜柱(2.1mm*50mm*1.8um)，流速0.3ml/min，進樣量5ul。流動相：A:乙腈(0.1％甲酸)；B:水(0.1％甲酸)；色譜洗脫條件如表1所示：

表1