[發明專利]一種硫酸阿貝卡星及其雜質的檢測方法

有效

• 申請號: 202010008154.0
• 申請日: 2020-01-06
• 公開（公告）號: CN111157647B
• 公開（公告）日: 2022-04-19
• 發明（設計）人: 袁耀佐;吳宇寧;張玫;朱曉玥;趙述強;王海東;戴俊
• 申請（專利權）人: 江蘇省食品藥品監督檢驗研究院;內蒙古普因藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/64;G01N30/86
• 代理公司: 北京德崇智捷知識產權代理有限公司 11467
• 代理人: 王斌

本發明涉及硫酸阿貝卡星，特別涉及硫酸阿貝卡星及其雜質的檢測方法。本發明通過優化獲得檢測硫酸阿貝卡星及其雜質的方法。首次建立了用于硫酸阿貝卡星含量和有關物質測定HPLC?PAD法，與日本藥典收載方法相比，專屬性好，方法耐用。

技術領域

本發明涉及硫酸阿貝卡星，特別涉及硫酸阿貝卡星及其雜質的檢測方法。

背景技術

硫酸阿貝卡星(Arbekacin Sulfate，ABK)系日本微生物化學研究所梅澤派夫等發現，日本明治制果制藥公司開發的氨基糖苷類抗生素，于1990年投放市場。阿貝卡星抗菌機理為抑制細菌蛋白質的合成。阿貝卡星與地貝卡星相似，對各種鈍化酶穩定，結構上可形成對鈍化酶的立體屏障，對氨基糖苷類滅活酶有高度拮抗力。該類藥物對臨床癥狀的改善與用量成正比，呈劑量依賴，且具有抗生素中最強的抗生素后效應(PAE)，至今在臨床上仍受重視。

氨基糖苷類抗生素的結構中含有多個羥基和氨基，它們是許多鈍化酶的作用靶點。因此，刪除其中與抗菌活性無關的羥基或保護個別的氨基就可以避免這些鈍化酶的攻擊，從而增強對耐藥菌的抗菌活力。據此，日本的梅澤等人對卡那霉素B進行了結構改造，刪除掉卡那霉素中3'和4'位的羥基，得到地貝卡星(Dibekacin，DKB)，其化學名稱：3'，4'-二脫氧卡那霉素B，地貝卡星保持了卡那霉素B的抗菌活性，在抵制鈍化酶攻擊方面明顯強于卡那霉素B。梅澤等人接著在地貝卡星的C-I氨基上引入a羥基Y氨基丁酸側鏈，得到阿貝卡星，其化學名稱：1-N-(L-4-氨基-2-羥基丁酰)-3'，4'-二脫氧卡那霉素B。阿貝卡星的耐酶性更好，其耳腎毒性均比母核低。

文獻報道的阿貝卡星合成方法如下：以卡那霉素B為初始原料，經過叔丁氧羰基保護卡那霉素B的五個氨基，羥醛縮合保護4″與6″位的羥基，接著在2,4,5-三碘咪唑、三苯基膦及咪唑存在下，消除3′與4′位羥基形成雙鍵，再在鹽酸的甲醇溶液中脫除氨基及羥基保護，催化加氫得到地貝卡星；以地貝卡星為原料，經過三甲基硅基保護所有的氨基和羥基，接著用合成得到的活性酯對1位氨基進行酰化，依次用鹽酸和水合肼脫除保護基，最后催化加氫得到阿貝卡星。硫酸阿貝卡星原料中的有關物質包括起始原料、中間體、副產物、降解產物以及合成原料中雜質等，部分已知雜質有半合成原料地貝卡星，原料中的雜質卡那霉素B和阿貝卡星異構體。這些有關物質和雜質都有可能存在阿貝卡星原料藥及制劑中影響產品質量。因此有必要建立靈敏、準確的分析方法對硫酸阿貝卡星進行質量控制。

JP16(2011年版)收載了硫酸阿貝卡星原料、硫酸阿貝卡星注射液；中國、美國、歐洲、英國藥典均未收載硫酸阿貝卡星原料及制劑。JP16對硫酸阿貝卡星原料及制劑用抗生素微生物檢定法對含量進行了控制，采用衍生化HPLC-熒光檢測法控制組分地貝卡星和有關物質的量。該方法靈敏度低，不能有效檢出阿貝卡星原料及制劑中的各種雜質。檢驗方法的有效性和科學性，應當是既能對藥品作出合格與不合格的判定，又能對樣品質量作出評價，從更高、更深層次掌握藥品的質量問題。現行檢驗方法在控制和評價藥品質量方面還存在一些問題，含量測定時可控性不太好，不能有效測定有關物質的質量，可對含量和有關物質檢查項的檢驗方法進一步完善。

發明內容

發明目的

本發明針對現有技術中存在的不能有效檢測出阿貝卡星原料和制劑中的各種雜質，如雜質有半合成原料地貝卡星，原料中的雜質卡那霉素B和阿貝卡星異構體，提出一種新的檢測方法。

技術內容

為了使硫酸阿貝卡星的質量評價更具系統性和科學性，參照國內外文獻及藥典對硫酸阿貝卡星有關物質及含量測定方法，本發明在方法學驗證的基礎上，建立了HPLC-PAD法測定硫酸阿貝卡星的有關物質。結果顯示，HPLC-PAD法檢測的雜質總量較多，而且可以直觀的歸屬各雜質的來源。本發明對流動相組成和含量進行了優化，使硫酸阿貝卡星各組分得到了很好的分離。實驗證明，該方法為一種不需要衍生化、靈敏的直接檢測方法。

技術方案