[發(fā)明專利]基于菌絲特征和生化指標(biāo)快速判斷杏鮑菇菌種退化的方法及其應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010007200.5
• 申請日: 2020-01-04
• 公開（公告）號: CN111118105A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫淑靜;許欣;柳婷
• 申請（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12Q1/28;C12Q1/34;C12Q1/40;C12R1/645
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 饒文君;蔡學(xué)俊

1.一種快速判斷杏鮑菇菌種退化的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）測定菌絲生長速度、菌絲直徑、菌絲分支量、菌株菌落形態(tài)：將杏鮑菇菌株接種至PDA培養(yǎng)基上，于25℃培養(yǎng)7d，進(jìn)行菌種活化；將活化后的不同代數(shù)杏鮑菇菌株接種至PDA培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，與菌株第一代原種相比，菌絲的平均生長速度下降≥22%，菌絲直徑下降≥16%，菌絲分支減少，菌絲生長停滯，菌落不規(guī)則隆起，菌絲稀薄邊緣呈極不規(guī)則圓形，白色，棉絮狀，判定為退化；

（2）測定纖維素酶分泌能力：菌落直徑、變色圈直徑以及酶指數(shù)分別在24.50～32.50mm、26.00～42.00mm、1.10～1.30EI，判定為退化；

（3）測定淀粉酶分泌能力：菌落直徑、變色圈直徑以及酶指數(shù)分別在52.00～70.00mm、13.50～26.00mm、0.25～0.37EI，判定為退化；

（4）錳過氧化物酶分泌能力：菌落直徑、變色圈直徑以及酶指數(shù)分別在52.00～71.00mm、13.50～26.00mm、0.25～0.37EI區(qū)間范圍或者小于以上范圍時(shí)，判定為退化；

（5）LBL脫色能力：脫色率在48.00%～55.00%區(qū)間范圍內(nèi)或者低于此范圍時(shí)，判定為退化；

（6）分解栽培料的速度：杏鮑菇菌株菌絲在栽培料中的平均生長速度下降百分?jǐn)?shù)≥7.5%，判定為退化。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述菌絲生長速度的測定方法為：菌絲萌發(fā)后每兩天測定其生長速度，直至菌絲長滿平板；菌絲生長的平均速度mm/d=長滿平板的菌絲長度/菌絲長滿平板的天數(shù)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述菌絲直徑、菌絲分支量、菌株菌落形態(tài)的觀察方法為：將活化后的各代杏鮑菇菌株接種至PDA培養(yǎng)基上，于25℃培養(yǎng)，觀察培養(yǎng)過程中菌落形態(tài)變化情況，直至菌絲長滿平板，并挑取各代活化后杏鮑菇菌種PDA培養(yǎng)基上相同位置的培養(yǎng)基一小塊，放置于載玻片上，制片后于40倍鏡下觀察菌絲形態(tài)，并用Image-Pro Plus軟件測定各代菌絲直徑。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述纖維素酶分泌能力、淀粉酶分泌能力、錳過氧化物酶分泌能力的測定方法為：將活化后的不同代數(shù)杏鮑菇菌株用孔徑1cm的打孔器分別接種至剛果紅-羧甲基纖維素鈉培養(yǎng)基、PDA可溶性淀粉培養(yǎng)基、PDA-愈創(chuàng)木酚培養(yǎng)基中，于25℃條件下培養(yǎng)，第7d測定菌落直徑以及變色圈直徑，計(jì)算酶指數(shù)EI；EI = 變色圈直徑/菌落直徑，結(jié)果以5個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差來表示。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述剛果紅-羧甲基纖維素鈉培養(yǎng)基配方為：羧甲基纖維素鈉2.0g/L，MgSO₄·7H₂O 1.88g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，蛋 白 胨2.0g/L，剛果紅0.25g/L，瓊脂粉15g/L；

所述PDA可溶性淀粉培養(yǎng)基配方為：馬鈴薯200g/L，葡萄糖10g/L，可溶性淀粉2g/L；

所述PDA-愈創(chuàng)木酚培養(yǎng)基配方為：馬鈴薯200g/L，葡萄糖10g/L，MgSO₄·7H₂O 1g/L，KH₂PO₄ 1g/L，維生素Ｂ₁ 0.02ｇ/L，瓊脂15g/L，愈創(chuàng)木酚0.1g/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述LBL脫色能力的測定方法為：將保藏的各代杏鮑菇菌株接種至PDA培養(yǎng)基上進(jìn)行活化，從活化后的不同代數(shù)杏鮑菇菌株的PDA培養(yǎng)基中移取5個(gè)直徑為1cm的菌絲塊于LBL液體培養(yǎng)基中，于25℃條件下進(jìn)行液體培養(yǎng)，每代5個(gè)生物學(xué)重復(fù)；液體培養(yǎng)3d后取培養(yǎng)液10 ml，8000 r/min、4℃離心15 min，移取上清液于615 nm處測定吸光值，脫色率DR=（1－(A_{615nm strain}/A615_{nm blank}))×100%。