[發(fā)明專利]一種促使多粘類芽孢桿菌產(chǎn)芽孢的發(fā)酵方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010005503.3
• 申請日: 2020-01-03
• 公開（公告）號: CN111073837B
• 公開（公告）日: 2023-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高健;張憶萱;徐虹;張麗;黃曄;柴小濤;王成群;鄧麗娜;劉長青
• 申請（專利權(quán)）人: 鹽城工學(xué)院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N3/00;C12R1/12
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 藍(lán)霞

本發(fā)明屬于生物技術(shù)和生物工程領(lǐng)域，具體涉及一種促使多粘類芽孢桿菌產(chǎn)芽孢的發(fā)酵方法。包括以下步驟：將多粘類芽孢桿菌在活化培養(yǎng)基進行活化；將多粘類芽孢桿菌接種至種子培養(yǎng)基進行種子培養(yǎng)；再將種子培養(yǎng)液接種至發(fā)酵培養(yǎng)液發(fā)酵培養(yǎng)，依次經(jīng)過一級升溫并調(diào)節(jié)pH值繼續(xù)培養(yǎng)；二級升溫并調(diào)節(jié)pH值繼續(xù)培養(yǎng)；發(fā)酵結(jié)束時，調(diào)節(jié)pH，即可；本發(fā)明能夠縮短多粘類芽孢桿菌發(fā)酵過程中的芽孢出芽時間及提高芽孢數(shù)量和出芽率，出芽孢率達(dá)91.4%以上，有利于減低生產(chǎn)成本和提高產(chǎn)品質(zhì)量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)和生物工程領(lǐng)域，具體涉及一種促使多粘類芽孢桿菌產(chǎn)芽孢的發(fā)酵方法。

背景技術(shù)

能源植物--菊芋是一種多年生草本植物，俗稱洋姜、鬼子姜，具有耐鹽堿、產(chǎn)量大等優(yōu)點。菊芋中含有菊粉（又稱菊糖），系多聚果糖，可占濕重的15~20%、干重的80%左右，灘涂荒地生物量可達(dá)3~6噸/畝。一些多粘類芽孢桿菌自身產(chǎn)菌粉酶，能夠利用菊粉作為發(fā)酵碳源。

多粘類芽孢桿菌（Paenibacillus?polymyxa，前稱Bacillus?polymyxa）對人或動植物無致病性，是一類生活在植物根際土壤或附生于植物根部的可直接或間接促進植物生長、生防作用和增強植物對逆境脅迫抵抗力的微生物，在生物農(nóng)藥和肥料研制和生產(chǎn)過程中具有重要價值。近年來最新研究成果日新月異、層出不窮，對其理解和認(rèn)知也趨于系統(tǒng)化。由于其誘人的應(yīng)用前景，美國環(huán)保署(EPA)將它列為可商業(yè)上應(yīng)用的微生物之一，我國農(nóng)業(yè)部也將其列為免做安全鑒定的一級菌種。

已有報道利用多粘類芽孢桿菌HY96-2菌株創(chuàng)制微生物農(nóng)藥（0.1億CFU/g細(xì)粒劑，商品名：康地蕾得）的報道，但是由于所用固態(tài)菌劑成本高，菌株數(shù)量低，使用效果欠佳等因素，近來來，市場上鮮有該產(chǎn)品。研究開發(fā)多粘類芽孢桿菌液體芽孢型生物肥料菌劑，可以避免上述缺陷，并能增加菌肥在土壤中活菌的數(shù)量和使用效果，且生產(chǎn)成本低廉，一舉多得。而提高上述菌肥中多粘類芽孢桿菌芽孢數(shù)量是產(chǎn)品開發(fā)的關(guān)鍵技術(shù)之一，并將有利于產(chǎn)品的運輸和長期儲存。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)存在的芽孢形成時間長、出芽率低以及芽孢數(shù)量不高等問題，本發(fā)明提供一種促使多粘類芽孢桿菌產(chǎn)芽孢的發(fā)酵方法，本發(fā)明能夠縮短多粘類芽孢桿菌發(fā)酵過程中的芽孢出芽時間及提高芽孢數(shù)量和出芽率。

為實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：

一種促使多粘類芽孢桿菌產(chǎn)芽孢的發(fā)酵方法，包括以下步驟：

（1）將多粘類芽孢桿菌在活化培養(yǎng)基進行活化；

（2）將多粘類芽孢桿菌接種至種子培養(yǎng)基進行種子培養(yǎng)；

（3）再將種子培養(yǎng)液接種至發(fā)酵培養(yǎng)液發(fā)酵培養(yǎng)，依次經(jīng)過一級升溫并調(diào)節(jié)pH值繼續(xù)培養(yǎng)；二級升溫并調(diào)節(jié)pH值繼續(xù)培養(yǎng)；發(fā)酵結(jié)束時，調(diào)節(jié)pH，即可；

所述的發(fā)酵培養(yǎng)提高活菌數(shù)量培養(yǎng)條件為：30℃，120?rpm，pH7.0，24?h；

所述的一級升溫并調(diào)節(jié)pH值繼續(xù)培養(yǎng)條件為：40-44℃，120?rpm，pH7.5-8.0，12h；

所述的二級升溫并調(diào)節(jié)pH值繼續(xù)培養(yǎng)條件為：45-50℃，120?rpm，pH8.0-8.5，12h。

優(yōu)選地，所述步驟（1）中活化條件為30℃，活化培養(yǎng)基包括以下組分：(NH₄)HPO₄1.0g/L，KCl?0.20g/L，MgSO₄.7H₂O?0.20g/L，酵母膏?2.0g/L，葡萄糖?5.0g/L，瓊脂?20.0g/L，且pH?7.0，培養(yǎng)48?h。