[發明專利]一種高速逆流色譜溶劑系統高通量篩選方法及應用

有效

• 申請號: 202010004712.6
• 申請日: 2020-01-03
• 公開（公告）號: CN111157646B
• 公開（公告）日: 2023-02-03
• 發明（設計）人: 王旭;容蓉;劉辰;馬青云;呂青濤
• 申請（專利權）人: 山東中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 李桂存

本發明屬于分離純化技術領域，涉及一種高速逆流色譜溶劑系統高通量篩選方法及應用。以三種不同的C18色譜柱分別建立了不同的線性預測模型，并針對指定化合物定向分離和復雜體系多成分分離等情況提出了兩種不同的溶劑系統選擇策略，將溶劑系統的選擇過程簡化為一次高效液相色譜分析和一次搖瓶試驗。同時本發明還提供了這種篩選方法的應用。

技術領域

本發明屬于分離純化技術領域，涉及一種高速逆流色譜溶劑系統高通量篩選方法及應用。

背景技術

高速逆流色譜是一種基于連續液液萃取的新型分離純化技術，其固定相和流動相均為可以回收的常用實驗室試劑，色譜條件溫和且制備量大。與其他色譜技術相比，不會像其它吸附色譜那樣對樣品造成不可逆的吸附，在分離過程中極大地保護了樣品中的原化學成分，優勢明顯。目前，高速逆流色譜已經廣泛應用在黃酮、生物堿、酚酸類、萜類、木脂素、皂苷、蛋白質、低聚果糖等重要的活性天然產物的分離制備方面。特別是在活性化合物的富集和純化、對映異構體的分離分析等方面表現出了高效液相色譜不可比擬的優勢。但是令人遺憾的是，長期以來，篩選得到一個合適的溶劑系統往往要花費實驗者絕大部分的時間和精力，制約著應用者的使用。

目前，應用最廣的高速逆流色譜溶劑系統的選擇方法是利用文獻參照相似結構化合物的已知的溶劑系統，進行搖瓶試驗，并測定樣品在上下兩相中的分配系數(K)，根據K值對文獻中的溶劑系統進行調整，直到得到滿意的分離效果。但是對于沒有研究基礎的化合物或者未知化合物，則可以通過溶劑系統族(The solvent family)來確定，其中包括：1991年，Oka等人以正己烷、乙酸乙酯、甲醇、正丁醇和水等五種溶劑為組成成分，按照極性大小順序排列組合成16種溶劑系統；Abbott等設計出13種組成不同的溶劑系統，并按照極性將其劃分為脂溶性、中等極性、極性三種類型。1992年，Ito以目標化合物的分配系數(K)介于0.5-2之間作為評價標準，引入氯仿-甲醇-水(2:1:1，v/v)為溶劑極性標尺，建立了正己烷-乙酸乙酯-甲醇/正丁醇-水溶劑系統的篩選方法。1995年出版的《Centrifugal PartitionChromatography》一書中報道了幾種重要的溶劑系統篩選理論：Foucault以正庚烷、正丁醇、乙腈、水等四種溶劑進行組合，構建了HBAW溶劑系統。Margraff以正庚烷、乙酸乙酯、甲醇、水構建了ARIZONA溶劑系統選擇理論。以上的溶劑系統選擇理論都是在強調選擇與目標化合物的極性相適宜的溶劑系統，選擇溶劑系統的過程中需要不斷試錯調整，直到挑選到合適的溶劑系統，其過程較復雜，實際應用中還存在困難。

為了減少搖瓶試驗次數，簡化高速逆流色譜溶劑系統選擇流程，降低篩選難度，近年來陸續出現了許多創新的溶劑系統選擇方法。針對于極性跨度大、應用廣、規律性強的ARIZONA型溶劑系統，J.Brent Friesen和Guido F.Pauli利用21種標準化合物在探討了正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水系統中的甲醇或正己烷含量與待分離樣品的lgK之間存在很強的線性，并且通過調節溶劑比例可以使樣品的K值滿足0.4≤K≤2.5，即得到合適的溶劑系統。在此基礎上采用薄層色譜法建立了以21種標準品的比移值為參照篩選溶劑系統的G.U.E.S.S.方法。這種方法極大地改變了傳統的溶劑系統選擇思路，提高了篩選效率，但是需要購買較為昂貴的標準品。