[發明專利]一種甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶測定試劑盒

有效

• 申請號: 202010004018.4
• 申請日: 2020-01-03
• 公開（公告）號: CN111172234B
• 公開（公告）日: 2023-05-16
• 發明（設計）人: 商憶文;章曉慶
• 申請（專利權）人: 浙江夸克生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/37
• 分類號: C12Q1/37
• 代理公司: 北京精金石知識產權代理有限公司 11470
• 代理人: 張黎

本發明公開了一種甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶測定試劑盒，涉及生物檢測技術領域。包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2，其成分及相應含量為：試劑R1：三羥甲基氨基甲烷5?10g/L；雙甘氨肽5?10g/L；疊氮鈉0.1?0.5g/L；試劑R2：甘氨酰脯氨酰對硝基苯胺對甲苯磺酸10?20g/L；乙二醇20?80ml/L；牛血清白蛋白2?8g/L；疊氮鈉0.1?0.5g/L。在實施過程中試劑R2中加入比例為1?5：1?2：1的甘露醇、甘露聚糖和葡糖胺，并控制R1和R2的體積比為5?10：1，增強了試劑的穩定性和準確性，并且提高了試劑的抗干擾能力，有利于在市場中進一步的推廣使用。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，具體涉及一種甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶測定試劑盒。

背景技術

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)分布于肝、腎、結締組織、唾液腺和血清等體液中，能特異的水解肽鏈末端第2位為脯氨酸所形成的肽鍵，在細胞內的微粒體和可溶部分其比活性明顯增高，其生理意義主要是水解血液中來自膠原的多肽，因此甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶的生理作用可能與膠原肽降解相關。

早在1966年，Hopsu-Havu和Glenner等在鼠的肝、腎組織中發現了一種新的二肽氨基肽酶。這種酶能水解甘氨酰-脯氨酰-B-萘胺，釋放二肽甘氨酰脯氨酸，而被稱為甘氨酰脯氨酸-B-萘胺酸。由于甘氨酰脯氨酰-B-萘胺有致癌作用，Nagatsu等合成了新底物甘氨酰脯氨酰對硝基苯胺，并為大家廣泛接受，這種酶也一度被稱為甘氨酰脯氨酸對硝基苯胺酶，現已通稱為甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(Glycyl?proline?dipeptidylaminopeptidase，GPDA)。

經臨床的大量實驗和研究數據分析，發現GPDA在疾病的診斷中有著明顯的變化趨勢，急性肝炎、慢活肝、肝硬化、阻塞性黃疸等，血清GPDA可有不同程度升高；胃癌病人血清GPDA明顯下降，一般在正常人的1/2左右；類風濕關節炎病人病程在15個月以上者，血清GPDA活性顯著降低；系統性紅斑狼瘡病人血清GPDA顯著降低；急性淋巴細胞性白血病、淋巴肉瘤和霍奇金病病人，血清GPDA顯著降低；藥物性肝損害、原發性膽汁性肝硬化引起肝內膽汁郁積者，血清GPDA活性升高。

由于甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶的含量變化與多種疾病有關，因此對甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶含量的準確檢測具有重要的意義。但是在甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶的檢測試劑中使用的主要原料甘氨酰脯氨酰對硝基苯胺對甲苯磺酸鹽配制成液體后不穩定，易水解變質，從而造成整個試劑盒的穩定性降低，進而影響了整個試劑盒的測定結果，因為如何提高甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶測定試劑盒的穩定性成為主要的研究方向。

例如，中國專利申請201510233316.X公開了一種定量測定人體血清中甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶活性的試劑，該試劑由分別放置的試劑I和試劑II組成，其中，所述試劑I含有Tris-雙甘肽緩沖液、底物穩定劑；所述試劑II含有甘氨酰脯氨酰對硝基苯胺對甲苯磺酸、底物穩定劑。該發明采用的試劑盒及檢測方法只需十幾微升血清，無需離心或電泳等分離處理，操作簡便，可滿足全自動化分析的要求，適用于大規模樣品的及時準確檢測，但是該申請中所使用的底物穩定劑為NaN₃，其在試劑I和試劑II中的加入量為0.01-0.15g/mL，其添加量比較高，較高含量的防腐劑會在一定程度上影響檢測結果的準確性和精密性，并且該申請在試劑盒中加入NaN₃，僅在一定程度上提高了甘氨酰脯氨酰對硝基苯胺對甲苯磺酸的穩定性，對試劑的準確性以及抗干擾性能并沒有提高。