[發明專利]霍亂弧菌O1群的快速恒溫檢測方法及試劑盒

在審

• 申請號: 202010003956.2
• 申請日: 2016-08-30
• 公開（公告）號: CN110951840A
• 公開（公告）日: 2020-04-03
• 發明（設計）人: 曹永梅;李園園;劉偉;李雪玲;賈犇;韋朝春;陸長德;李亦學
• 申請（專利權）人: 上海旺旺食品集團有限公司;上海產業技術研究院
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/63
• 代理公司: 上海麥其知識產權代理事務所(普通合伙) 31257
• 代理人: 董紅曼

1.一種針對霍亂弧菌O1群的快速恒溫檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括能擴增霍亂弧菌O1群基因組特異性堿基序列的引物組，所述能擴增霍亂弧菌O1群基因組特異性堿基序列的引物組選自引物組A、B、B’之任意一組；

引物組A：

上游外引物F3_A：5’-AACAAACTGGCGTTGGCT-3’(SEQ ID NO：1)；

下游外引物B3_A：5’-TCGTTATCCACACGCTGC-3’(SEQ ID NO：2)；

上游內引物FIP_A：5’-AGACCGGGTCAGCGTCGTAATGGCTTGAGTTTTGGTGCG-3’(SEQ ID NO：3)；

下游內引物BIP_A：5’-CTGCAACTGTCGCACATGGTCTTCAAGATTCGGCCAGACGAG-3’(SEQ IDNO：4)；

引物組B：

上游外引物F3_B：5’-CCTCTGGTCTCTTTGACTAAGG-3’(SEQ ID NO：5)；

下游外引物B3_B：5’-AGTTTCACGCCTTGCTCAC-3’(SEQ ID NO：6)；

上游內引物FIP_B：5’-TCGGGAAAATGTAGGTCGCCACCGAAATCAAAACGGCTGGC-3’(SEQ IDNO：7)；

下游內引物BIP_B：5’-CGGCGGATGGTAAAAACAAAGCAGAAATGGCCCGGTACCAGAG-3’(SEQ IDNO：8)；

引物組B’：

上游外引物F3_B：5’-CCTCTGGTCTCTTTGACTAAGG-3’；

下游外引物B3_B：5’-AGTTTCACGCCTTGCTCAC-3’；

上游內引物FIP_B：5’-TCGGGAAAATGTAGGTCGCCACCGAAATCAAAACGGCTGGC-3’；

下游內引物BIP_B：5’-CGGCGGATGGTAAAAACAAAGCAGAAATGGCCCGGTACCAGAG-3’；

下游環引物LB_B：5’-AGCACGGTAACTCTTTTGCCTCTG-3’(SEQ ID NO：17)。

2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，其還包括Bst DNA聚合酶反應緩沖液、BstDNA聚合酶、dNTP溶液、Mg²⁺、甜菜堿中的一種或多種。

3.一種針對霍亂弧菌O1群的快速恒溫檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的酶反應體系包括：1×Bst DNA聚合酶反應緩沖液，2-9mmol/L Mg²⁺，1.0-1.6mmol/L dNTP，0.8-2.0μmol/L的FIP和BIP引物，0.15-0.3μmol/L的F3和B3引物，包括或不包括0.4-1.0μmol/L的LB引物，0.16-0.64U/μL Bst DNA聚合酶，和0-1.5mol/L的甜菜堿。