[發(fā)明專利]一種組織金屬蛋白酶抑制劑1的納米抗體、其編碼序列及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010003264.8
• 申請日: 2020-01-02
• 公開（公告）號: CN111018993B
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發(fā)明（設計）人: 王永中
• 申請（專利權）人: 安徽合創(chuàng)健康生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/38
• 分類號: C07K16/38;C12N15/11;G01N33/68
• 代理公司: 北京力量專利代理事務所(特殊普通合伙) 11504
• 代理人: 姚遠方

本發(fā)明公開了一種人組織金屬蛋白酶抑制劑1(TIMP1)納米抗體的VHH鏈，包括框架區(qū)FR和互補決定區(qū)CDR，公開了框架區(qū)FR1?4的氨基酸序列和互補決定區(qū)CDR1?3的氨基酸序列；本發(fā)明公開了一種TIMP1納米抗體，還公開了一種DNA分子，它編碼本發(fā)明所述的TIMP1納米抗體的VHH鏈或本發(fā)明所述的TIMP1納米抗體；本發(fā)明還公開了一種宿主細胞，它可以表達針對TIMP1的納米抗體，具有非常高的親和力；還公開了該納米抗體檢測TIMP1的用途，可以應用于臨床上血清中TIMP1的檢測。

技術領域

本發(fā)明涉及一種組織金屬蛋白酶抑制劑1(TIMP1)納米抗體、其編碼序列及其用途，屬于生物醫(yī)學或生物制藥技術領域。

背景技術

肝纖維化是目前全世界發(fā)病率與死亡率居高不下的主要原因之一。肝星形細胞的激活和異常增殖導致細胞外基質成分的大量分泌和累積，例如III型前膠原N端肽(PIIINP)、透明質酸(HA)、IV型膠原(CIV)、VI型膠原(CVI)、粗纖維調節(jié)素(CXIV，Undulin)、層粘素(LN)、細胞粘合素C(Tenascin)等，是最終導致進展性肝纖維化的主要原因之一。幾乎所有的肝臟疾病，特別是乙型肝炎、丙型肝炎、酒精性肝病、自身免疫性或遺傳性肝病等常見高發(fā)肝臟疾病，都會逐漸發(fā)展為進展性肝纖維化，最終發(fā)展為肝硬化。

肝纖維化是由慢性肝損傷導致的細胞外基質的大量分泌和累積而引發(fā)的，這種累積是可逆性的，臨床上一般觀察不到致死性結節(jié)形成；而肝硬化則是細胞外基質大量分泌和累積到一定程度后，圍繞肝實質細胞形成大量壞死性結節(jié)，其病理過程不可逆。因此，對任何肝臟疾病的預防和治療的主要臨床需要之一，便是要及早進行早期診斷和監(jiān)測，防治可逆性的肝纖維化逐漸轉變?yōu)椴豢赡娴母斡不?/p>

肝臟組織活檢仍然是目前診斷肝纖維化的主要的和可靠的手段之一，被認為是肝臟纖維化診斷的“金標準”。然而，肝活檢是一種創(chuàng)傷性操作，患者依從性差，存在可能的并發(fā)癥，難以動態(tài)觀察和重復進行，并且不能有效地進行定量評價。因此，肝纖維化的無創(chuàng)血清學診斷是組織活檢的一種有益的補充和替代檢測方法。

目前，在肝纖維化血清學檢測中，常見的肝纖維化生物標志物有組織金屬蛋白酶抑制劑1(TIMP-1)、III型前膠原N端肽(PIIINP)、透明質酸(HA)、IV型膠原(CIV)、VI型膠原(C VI)、粗纖維調節(jié)素(CXIV，Undulin)、層粘素(LN)、、轉化生長因子(TGF)、細胞粘合素C(Tenascin)、基質金屬蛋白酶及抑制劑復合物(MMP-2/MMP-9/TIMP-1)等。當前，TIMP1被認為是一個慢性肝炎和肝纖維化的生物標志物(Robert Flisiak,et al.World JGastroenterol.2004；10(18):2661–2665)，在慢性肝臟疾病的進展中其作為一個檢測指標與肝纖維化的狀態(tài)緊密相關(Lichtinghagen R,et al.J Hepatol.2013,59(2):236-42)。目前最廣泛使用的TIMP1測定方法是基于傳統(tǒng)單克隆抗體的免疫分析方法。由于上述技術方法于需要制備單克隆抗體，所需成本較高，而且其檢測方法的特異性和魯棒性不強，最低檢測限仍然偏高。當前，TIMP1的臨床血清學檢測仍然需要最低檢測限與最低定量限在亞ng級的定量檢測方法，仍然需要特異性和魯棒性更優(yōu)的定量檢測方法。

因此，發(fā)明一種組織金屬蛋白酶抑制劑1的納米抗體、其編碼序列及其用途來解決上述問題很有必要。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種TIMP1納米抗體、其編碼序列及其用途。本發(fā)明提供的TIMP1納米抗體具有非常高的親和力，這種高親和力特性賦予了該納米抗體在檢測TIMP1時的高靈敏度，使其具有更小的最低檢測限與最低定量限，從而可以通過建立固相酶聯(lián)免疫法(ELISA)更優(yōu)地應用于臨床上血清中TIMP1的檢測。

本發(fā)明為解決上述技術問題，采用以下技術方案來實現(xiàn)：

本發(fā)明的第一方面，提供了一種針對TIMP1的納米抗體的VHH鏈，包括框架區(qū)FR和互補決定區(qū)CDR。