[發(fā)明專利]一種羧基生物磁珠的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010002039.2
• 申請(qǐng)日: 2020-01-02
• 公開（公告）號(hào): CN111013508A
• 公開（公告）日: 2020-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金麗素
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 金麗素
• 主分類號(hào): B01J13/02
• 分類號(hào): B01J13/02;C12N7/00
• 代理公司: 廣州君咨知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44437
• 代理人: 劉智君

本發(fā)明的提供了一種羧基生物磁珠的制備方法，該方法通過羧基化磁性微球的制備、羧基化磁性微球的活化和羧基生物磁珠的制備三個(gè)步驟制備得到羧基生物磁珠，該羧基生物磁珠將含唾液酸的胎球蛋白結(jié)合在羧基化磁性微球上制成羧基生物磁珠，使得胎球蛋白中的唾液酸作為流感病毒的受體從而富集流感病毒，該羧基生物磁珠可以用于大體積的生物樣品的檢測，且該羧基生物磁珠生物磁珠的指標(biāo)簡單，試劑與設(shè)備的要求低，且制備得到的羧基生物磁珠的穩(wěn)定性好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種羧基生物磁珠的制備方法。

背景技術(shù)

生物磁珠是指具有細(xì)小粒徑的超順磁微球，一般具有超強(qiáng)的順磁性，在磁場中能夠迅速聚集，離開磁場后又能夠有助于磁分離地均勻分散。其次，具有合適的且差別較小的粒徑，保證了足夠強(qiáng)的磁響應(yīng)性又不會(huì)沉降。再次，具有豐富的表面活性基團(tuán)，以便可以和生化物質(zhì)偶聯(lián)，并在外磁場的作用下實(shí)現(xiàn)與被待測樣品的分離。與傳統(tǒng)的分離方法相比，把磁珠用于生化樣品復(fù)雜組分的分離，能夠?qū)崿F(xiàn)分離和富集的同時(shí)進(jìn)行，有效地提高了分離速度和富集效率，同時(shí)也使分析檢測的靈敏度大大提升。

唾液酸（Sialicacid）唾液酸是9-碳單糖的衍生物，它不僅具有誘導(dǎo)入侵病菌的作用，目前認(rèn)知是神經(jīng)節(jié)苷脂的傳遞遞質(zhì)，并且是大腦的組成部分，唾液酸同時(shí)也是流感病毒的受體，是流感病毒結(jié)合在黏液細(xì)胞中的結(jié)合位點(diǎn)。在胎球蛋白的寡糖兩端含有豐富的唾液酸。

將含有含有唾液酸的胎球蛋白和生物磁珠相結(jié)合用來富集流感病毒暫無報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題本發(fā)明提供一種羧基生物磁珠的制備方法。該羧基生物磁珠可以富集流感病毒，用于臨床檢測，本發(fā)明的內(nèi)容如下：

本發(fā)明的目的在于提供一種羧基生物磁珠的制備方法，其技術(shù)點(diǎn)在于：所述的羧基生物磁珠的制備方法包括以下步驟：

步驟1：羧基化磁性微球的制備：將FeCl₃·6H₂O和FeCl₂·4H₂O混合均勻溶解于水中，調(diào)節(jié)pH至9~11，70~80℃下反應(yīng)0.5~1h，然后滴加入油酸于50~90℃下反應(yīng)0.5~1h得到混合物，反應(yīng)結(jié)束后將所述的混合物進(jìn)行磁分離，制得羧基化磁性微球；

步驟2：羧基化磁性微球的活化：將步驟1制備得到的羧基化磁性微球放置于離心管中于混合儀上振蕩5～10min，然后將離心管放置于磁分離架上，待磁珠完全被吸附，去除上清液，分兩次加入2-(N-嗎啉)乙磺酸一水合物溶液進(jìn)行洗滌，隨后再加入碳二亞胺混合均勻，于20~30℃條件下，在混合儀上活化20~40min；

步驟3：羧基生物磁珠的制備：在步驟2制備活化后羧基化磁性微球中含唾液酸的胎球蛋白溶液，于2~6℃溫度下偶聯(lián)，反應(yīng)3~4h后離心得到上清液和沉淀，棄上清，用PBS緩沖液重懸活化后羧基化磁性微球，再加入甘氨酸溶液，室溫振蕩20~40min后棄去上清，用PBS緩沖液重懸制得羧基生物磁珠。

在本發(fā)明的有的實(shí)施例中，所述的步驟1中FeCl₃·6H₂O和FeCl₂·4H₂O的混合物的重量：水的體積：油酸的體積=（5~6.4）g：72mL：（2~3）mL。

在本發(fā)明的有的實(shí)施例中，所述的步驟1中FeCl₃·6H₂O和FeCl₂·4H₂O的重量之比為（1~2）：4。

在本發(fā)明的有的實(shí)施例中，所述的步驟1中調(diào)節(jié)pH的溶液為濃氨水，所述的濃氨水的添加量為8~12mL。

在本發(fā)明的有的實(shí)施例中，所述的步驟1羧基化磁性微球的制備在N₂保護(hù)下攪拌進(jìn)行。