[發(fā)明專利]一種血漿外泌體質(zhì)譜峰及其運(yùn)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010001795.3
• 申請(qǐng)日: 2020-01-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111060585B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈宇輝;彭程
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N27/64
• 分類號(hào): G01N27/64
• 代理公司: 上海卓陽(yáng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31262
• 代理人: 周春洪

本發(fā)明涉及一種血漿外泌體質(zhì)譜峰及其運(yùn)用，所述的質(zhì)譜峰如摘要附圖所示，其可用于骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移檢測(cè)以及骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移理論研究。本發(fā)明還涉及一種基于質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)外泌體特征譜早期診斷骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移的方法：利用外泌體在骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移和非肺轉(zhuǎn)移患者中的差異不同及存在特征質(zhì)譜峰，通過(guò)基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI?TOFMS)技術(shù)檢測(cè)患者血漿外泌體樣本，從而早期診斷骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移。其中基質(zhì)是由芥子酸和乙腈、三氟乙酸和去離子水組成的混合溶劑配制而成。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)是：提供了判定骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移的標(biāo)準(zhǔn)外泌體質(zhì)譜峰，其判定結(jié)果準(zhǔn)確可靠、可信度高，具有很好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，是一種血漿外泌體質(zhì)譜峰及其運(yùn)用。

背景技術(shù)

基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(Matrix-assisted laserdesorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)自1980年代發(fā)展起來(lái)，具有超高靈敏度和特異性，目前已廣泛應(yīng)用于臨床實(shí)驗(yàn)室診斷。MALDI-TOF MS技術(shù)通過(guò)對(duì)生物分子的分子量進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定，實(shí)現(xiàn)生物大分子的鑒定分析。通過(guò)分析不同細(xì)菌的指紋圖譜，MALDI-TOFMS能實(shí)現(xiàn)臨床微生物快速鑒定。此外，MALDI-TOF MS技術(shù)也廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)研究。

外泌體是胞外囊泡(ExtracellularVesicles，EV，胞外囊泡尺寸約30-1000nm)的一種，其直徑約為30-150nm，外泌體囊壁由磷脂雙分子層組成，囊壁富含膜蛋白。外泌體囊泡內(nèi)含有蛋白質(zhì)、核酸(miRNA、mRNA等)、膜蛋白或脂質(zhì)等物質(zhì)。大量文獻(xiàn)和臨床實(shí)踐表明，外泌體可以作為各種具有外泌體分泌的臨床疾病診斷或鑒別診斷廣泛的運(yùn)用。MALDI-TOFMS技術(shù)可以通過(guò)對(duì)外泌體樣本的檢測(cè)分析獲得不同某一類疾病人體個(gè)體背景相同情況下，高靈敏度的發(fā)現(xiàn)疾病的變化，其中在腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移進(jìn)展中，患者自身的各種腫瘤相關(guān)的生物學(xué)信息可以通過(guò)外泌體數(shù)量、攜帶蛋白、核酸的不同被檢測(cè)除差異。在不同腫瘤之中，該質(zhì)譜特征譜峰會(huì)有所不同特征。

骨肉瘤是異質(zhì)性非常強(qiáng)的惡性骨腫瘤，在傳統(tǒng)各種腫瘤相關(guān)蛋白或標(biāo)志物檢測(cè)方面沒(méi)有獲得研究進(jìn)展或臨床上可以區(qū)分骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物或有效的高靈敏度的技術(shù)方法，在臨床上一般通過(guò)CT影像學(xué)來(lái)發(fā)現(xiàn)骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移，存在早期骨肉瘤微小肺轉(zhuǎn)移燥很難診斷和鑒別的臨床困境。血液外泌體是最早就能反應(yīng)骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移的生物學(xué)信息，利用骨肉瘤外泌體的質(zhì)譜特征譜的差異，理論上可以在極早期診斷和鑒別診斷骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移。

關(guān)于本發(fā)明一種血漿外泌體質(zhì)譜峰及其用途目前還未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個(gè)目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種血漿外泌體質(zhì)譜峰的用途。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種檢測(cè)血漿外泌體質(zhì)譜峰的試劑的用途。

為實(shí)現(xiàn)上述第一個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

一種血漿外泌體質(zhì)譜峰在骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移理論研究中的應(yīng)用，所述的血漿外泌體質(zhì)譜峰滿足兩個(gè)峰分別在3520-3530道爾頓和5130-5170道爾頓均存在時(shí)，檢測(cè)結(jié)果為骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移陽(yáng)性，否則為陰性。

為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

檢測(cè)血漿外泌體質(zhì)譜峰的試劑在制備檢測(cè)骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移試劑盒中的應(yīng)用。

作為本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，所述的試劑是由芥子酸和乙腈、三氟乙酸和去離子水制成，其中，乙腈、三氟乙酸和去離子水的體積比為(45-55):(0.01-0.2):(44.9-54.9)；乙腈、三氟乙酸和去離子水制成混合溶劑，芥子酸和混合溶劑的質(zhì)量體積比為(15-25)：(0.1-2)mg/ml。