[發(fā)明專利]一種蛋白質的表達方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010001544.5
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN113122598A
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發(fā)明（設計）人: 戴建新;侯盛;聶麗;寇庚;郭懷祖;郭清城;徐進;張存超;黃衛(wèi)紅
• 申請（專利權）人: 上海張江生物技術有限公司;上海百邁博制藥有限公司;上海邁泰君奧生物技術有限公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12N5/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種抗PD-1抗體的制備方法，其特征在于，所述方法使用無血清、無動物源組分的基礎培養(yǎng)基及補充培養(yǎng)基對含有抗PD-1抗體基因序列的CHO宿主細胞進行培養(yǎng)表達，所述基礎培養(yǎng)基為CHOM-B系列的組合培養(yǎng)基，所述補充培養(yǎng)基為CHOM-S系列的組合培養(yǎng)基。

2.根據(jù)權利要求1所述的抗PD-1抗體的制備方法，其特征在于，所述方法的CHO宿主細胞的培養(yǎng)表達包含細胞擴增階段、灌流培養(yǎng)階段及補充培養(yǎng)階段，在細胞擴增和灌流培養(yǎng)階段使用基礎培養(yǎng)基，補充培養(yǎng)階段使用補充培養(yǎng)基。

3.根據(jù)權利要求2所述的抗PD-1抗體的制備方法，其特征在于，所述CHO宿主細胞灌流培養(yǎng)階段的條件為：溫度為30℃~39℃；基礎培養(yǎng)基pH為6.6~7.1；溶氧量30%~60%；每日補充葡萄糖3~5g/L；攪拌轉速80~150rpm。

4.根據(jù)權利要求3所述的抗PD-1抗體的制備方法，其特征在于，所述CHO宿主細胞灌流培養(yǎng)階段的條件為：溫度為36.5℃~37.5℃；基礎培養(yǎng)基pH為6.9~7.0；溶氧量40%~50%；每日補充葡萄糖3~5g/L；攪拌轉速80~150rpm。

5.根據(jù)權利要求2所述的抗PD-1抗體的制備方法，其特征在于，所述CHO宿主細胞補充培養(yǎng)階段的條件為：在灌流培養(yǎng)培養(yǎng)的第2~4天，降低溫度至32℃~34℃，pH為7.0~7.3，添加補充培養(yǎng)基，進行補充培養(yǎng)，每日添加補充培養(yǎng)基的量為上灌體積的1%~5%，補充培養(yǎng)8~18天。

6.根據(jù)權利要求5所述的抗PD-1抗體的制備方法，其特征在于，所述CHO宿主細胞補充培養(yǎng)階段的條件為：在灌流培養(yǎng)培養(yǎng)的第2~4天，降低溫度至33℃，pH為7.0~7.1，添加補充培養(yǎng)基，進行補充培養(yǎng)，每日添加補充培養(yǎng)基的量為上灌體積的1%~5%，低溫補充培養(yǎng)10~12天。

7.根據(jù)權利要求1-6所述的抗PD-1抗體的制備方法，其特征在于，所述基礎培養(yǎng)基為CHOM-B01與CHOM-B02組合、CHOM-B01與CHOM-B03組合、CHOM-B01與CHOM-B02及CHOM-B03組合。

8.根據(jù)權利要求7所述的抗PD-1抗體的制備方法，其特征在于，所述基礎培養(yǎng)基為CHOM-B01：CHOM-B02為1:1~1:5，CHOM-B01：CHOM-B03為1:1~1:0.1。

9.根據(jù)權利要求8所述的抗PD-1抗體的制備方法，其特征在于，所述基礎培養(yǎng)基為CHOM-B01：CHOM-B03為1:1~1:0.1。

10.根據(jù)權利要求1-6所述的抗PD-1抗體的制備方法，其特征在于，所述補充培養(yǎng)基為CHOM-S01與CHOM-S03組合、CHOM-S01與CHOM-S04的組合、CHOM-S01與CHOM-S03及CHOM-S04組合。

11.根據(jù)權利要求10所述的抗PD-1抗體的制備方法，其特征在于，所述補充培養(yǎng)基為CHOM-S01：CHOM-S03為1:1~1:0.3，CHOM-S01：CHOM-S04為1:1~1:7。

12.根據(jù)權利要求11所述的抗PD-1抗體的制備方法，其特征在于，所述補充培養(yǎng)基為CHOM-S01：CHOM-S04為1:1~1:4。