[發明專利]一種鯉冠狀病毒HL39的數字RT-PCR檢測引物及應用

有效

• 申請號: 202010001460.1
• 申請日: 2020-01-02
• 公開（公告）號: CN111057792B
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 陳孝宇;郭少飛;陳鑫;周旋
• 申請（專利權）人: 武漢海關技術中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

本發明提供了一種鯉冠狀病毒HL39的數字RT?PCR檢測引物及應用，所述方法包括利用CyNV基因片段設計的引物序列和探針序列進行數字PCR擴增反應。利用本發明所提供的數字PCR檢測引物可以實現對鯉冠狀病毒樣品的精準檢測，靈敏度可以達到2個拷貝。此外，該方法步驟簡便易于操作，因此在實際應用中具有很大的靈活性，是一種檢測鯉冠狀病毒的有效方法。

技術領域

本發明屬于病毒分子檢測技術領域，具體涉及一種鯉冠狀病毒HL39的數字RT-PCR檢測引物及應用。

背景技術

套式病毒目(Nidovirales)于1996年首次由國際病毒分類委員會(InternationalCommitt ee on Taxonomy of Viruses,ICTV)提出，該目病毒宿主廣泛，可引起哺乳動物、鳥類、爬行動物、魚蝦等水生動物多種重大疾病。套式病毒目冠狀病毒科是一類線形單股正鏈RNA病毒，最早于1937年從雞身上分離出來，Almeida等對這些病毒進行了形態學研究，電子顯微鏡觀察發現這些病毒的包膜上有形似日冕的棘突，故提出命名這類病毒為冠狀病毒^[1]。1975年，國際病毒命名和分類委員會正式命名了冠狀病毒科。由冠狀病毒科的嚴重急性呼吸綜合征病毒(SARS-CoV)引起的非典型性肺炎，世界上有30多個國家和地區相繼報道出現病例，病死率超過10％。2012年，中東地區開始出現新型冠狀病毒，病死率超過50％，引起了世界范圍的廣泛關注，造成社會對冠狀病毒的恐慌。因此，對冠狀病毒進行深入研究具有重要意義。

2018年ICTV調整了套式病毒目的分類，新增了Abyssoviridae、Medioniviridae、Mono niviridae、Euroniviridae和Tobaniviridae等5個病毒科，其中在Tobaniviridae科下新增Onc otshavirus屬。2017年，申請人發表了鯽冠狀病毒的相關研究成果，目前鯉冠狀病毒(Cypr inid Nidovirus,CyNV)尚無公開報道，更也無有效的檢測方法。

申請人首次從鯉魚病變組織中分離出一株鯉冠狀病毒，針對該病毒，設計了數字RT-P CR檢測引物，從而實現鯉冠狀病毒的微量、快速、精確檢測。

發明內容

本發明的目的在于提供了一種鯉冠狀病毒HL39的數字RT-PCR檢測引物，所述的引物為F：5'-ACCTCTTACACTCTGCCCCT-3'和R：5'-AAAGTGCCGGTGGTTGAGAG-3'，所述病毒的保藏編號為CCTCC NO：V201988。

本發明的另一個目的在于提供了一種鯉冠狀病毒HL39的數字RT-PCR檢測引物的應用。所述的引物可用于制備檢測鯉冠狀病毒HL39的檢測試劑盒。

為了達到上述目的，本發明采取以下技術措施：

一種鯉冠狀病毒HL39的數字RT-PCR檢測引物，所述的引物為F：5'-ACCTCTTACACTCTGCCCCT-3'和R：5'-AAAGTGCCGGTGGTTGAGAG-3'；所述病毒的保藏編號為CCTCC NO：V201988。

鯉冠狀病毒HL39的數字RT-PCR檢測引物在制備檢測鯉冠狀病毒的檢測試劑盒中的應用；

以上所述的應用中，優選的，所述的鯉冠狀病毒HL39的檢測試劑盒包括：待測樣品的cDNA，2×SuperMix，上下游引物，探針；

以上所述的試劑盒中，優選的，所述的探針為：P：5'-FAM-AGCGCAAACCTTCACCGGTAACCGCCAGA-TAMRA-3'。

與現有技術相比，本發明具有以下優點：

利用本發明所提供的數字RT-PCR檢測方法和試劑盒可以實現對含鯉冠狀病毒樣品的精準檢測，靈敏度可以達到2個拷貝。此外，該方法步驟簡便易于操作，因此在實際應用中具有很大的靈活性，是一種檢測鯉冠狀病毒的有效方法。

具體實施方式