[發明專利]一種利用間接ELISA法檢測破傷風抗體效價的檢測方法

有效

• 申請號: 202010001033.3
• 申請日: 2020-01-02
• 公開（公告）號: CN111044721B
• 公開（公告）日: 2020-11-17
• 發明（設計）人: 白毅;肖曉;劉文娟
• 申請（專利權）人: 山東帝俊生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/58
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 陳娟

1.一種利用間接ELISA法檢測破傷風抗體效價的檢測方法，其特征在于，所述檢測的試劑盒包括：抗原包被板、樣品稀釋液A、樣品稀釋液B、酶標記物鼠抗人IgG、底物液、洗滌液、終止液；

所述樣品稀釋液A含有以下成分：乙二胺四乙酸二鈉 0.5~1.2g/L、季銨淀粉醚0.2~0.5g/L、甘油0.5~1.0g/L、海藻糖醇0.2g/L、氯化鈉8.5~10.5g/L、硼酸鹽緩沖液 0.8~1.2g/L、疊氮鈉0.3~0.5g/L；所述樣品稀釋液B為濃度為7.5g/L的吐溫-80及生理鹽水。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述抗原包被板為破傷風類毒素包被微孔板，具體處理過程為：

（1）：添加100mM DTT于破傷風類毒素中，25℃避光處理1小時后添加固體尿素顆粒，至尿素濃度為4M，取處理后的破傷風類毒素于PBS緩沖液中透析4h；

（2）將處理后的破傷風類毒素經離子交換柱及疏水層析柱純化即可。

3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述底物液含有以下成分： 4-羧乙基哌嗪乙磺酸30-35g/L、檸檬酸8-10g/L、磷酸氫二鈉8.5-11.0g/L、TMB3-5g/L。

4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述洗滌液含有以下成分：氯化鈉15g/L、碘化鉀3g/L、磷酸氫鈉0.255g/L，磷酸氫鉀0.45g/L。

5.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述終止液為H₂SO₄0.8mol/L。

6.根據權利要求1-5任一項所述的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1）樣品預稀釋：在血清稀釋板上，每孔加入樣品稀釋液A 100ul，再加入待測樣品10ul，輕輕震蕩混勻待用；

(2）加樣：在抗原包被板上，設標準品孔，每孔加入相應標準品 100ul；留空白對照1孔；其余樣品孔，每孔加入樣品稀釋液B 100ul，再加入預稀釋過的樣品10ul，輕輕震蕩混勻；

(3）溫育：加好樣品的抗原包被板，用封口膠封蓋后置37℃溫育30分鐘；

(4）洗板：溫育后，用洗滌液洗滌5次，每次浸泡30秒，洗完后拍干；

(5）加酶：每孔加入酶標記物100ul，輕輕震蕩混勻；

(6）溫育：加好酶標記物的抗原包被板，用封口膠封蓋后置37℃溫育20分鐘；

(7）洗板：溫育后，用洗滌液洗滌5次，每次浸泡30秒，洗完后拍干；

(8）顯色：每孔先加入底物液100 ul，輕輕震蕩混勻，用封口膠封蓋后置37℃避光顯色10分鐘；

(9）測量：顯色完畢后，每孔加入終止液50 ul，輕輕震蕩混勻，10分鐘內測定結果；以空白對照孔調零，置酶標儀450nm/630nm（620nm）波長處測定各孔吸光值。

7.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述標準品的濃度為10、5、2.5、1 IU/ml。