[發明專利]用于檢測產志賀毒素大腸埃希氏菌的引物組合及檢測試劑盒

有效

• 申請號: 202010000652.0
• 申請日: 2020-01-02
• 公開（公告）號: CN110982916B
• 公開（公告）日: 2023-06-09
• 發明（設計）人: 劉思潔;趙薇;李可維
• 申請（專利權）人: 劉思潔;趙薇;李可維
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/19
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹

本發明公開一種用于檢測產志賀毒素大腸埃希氏菌的引物組合及檢測試劑盒。本發明提供的引物組合由引物組I、引物組II和引物組III組成，即序列1至序列18所示的18條引物，實現了對產志賀毒素的大腸埃希氏菌的全部基因亞型進行快速檢測。

技術領域

本發明涉及細菌的分子生物學檢測領域。更具體地，涉及一種用于檢測產志賀毒素大腸埃希氏菌的引物組合及檢測試劑盒。

背景技術

產志賀毒素大腸桿菌(Shigatoxin-producing?Escherichiacoli,STEC)是一類能產志賀毒素(志賀毒素1和/志賀毒素2)的大腸埃希氏菌的總稱，是引起人類疾病的重要食源性致病菌之一，可引起人水樣腹灣、出血性腸炎以及溶血性尿毒綜合征(HUS)等，具有較高的發病率和死亡率。近年來，STEC在全球范圍內引起散發感染和暴發報道明顯增多，加強對STEC的日常監測，尤其對暴發疫情的現場快速處置尤為重要。目前，用于檢測STEC的實驗室方法很多，如傳統檢測法、免疫檢測法和分子檢測法。其中基因水平的檢測，特別聚合酶鏈式反應(PCR)作為常用的一種分子生物學檢測手段，已被普遍應用到大腸桿菌的檢測當中，也是目前STEC暴發疫情處置首選的實驗室檢測技術。但是，就普通PCR技術來說，無論是單一還是多重反應都至少需要2-3小時左右的擴增后再進行電泳的步驟。而熒光定量PCR技術雖然不用進行電泳，但受熒光定量PCR儀通道數量的影響，以及多重熒光定量PCR試劑需要配置多種熒光探針，價格十分昂貴，并且高通道熒光定量PCR儀亦價格不菲，同時對實驗室條件要求更高，基層推廣受限。

此外，志賀毒素1(Stx1)基因存在a，c和d亞型，志賀毒素2(Stx2)基因存在a，b，c，d，e，f和g亞型。迄今為止，市場上還未見能夠檢測出志賀毒素1(Stx1)及2(Stx2)基因序列中全部基因亞型的方法。

發明內容

本發明的第一個目的在于提供用于檢測產志賀毒素大腸埃希氏菌的引物組合。

本發明的第二個目的在于提供上述引物組合在制備用于檢測產志賀毒素大腸埃希氏菌的試劑盒中的應用，及檢測試劑盒。

本發明的第三個目的在于提供一種產志賀毒素大腸埃希氏菌的檢測方法。

為達到上述目的，本發明采用下述技術方案：

第一方面，本發明提供一種用于檢測產志賀毒素大腸埃希氏菌的引物組合：由引物組I、引物組II和引物組III組成：

所述引物組I由引物UidA-F3、引物UidA-B3、引物UidA-FIP、引物UidA-BIP、引物UidA-LF和引物UidA-LB組成；用于檢測待測物是否含有大腸埃希氏菌。

所述引物UidA-F3為序列表SEQ?ID?No.1所示的核苷酸序列，所述引物UidA-B3為序列表SEQ?ID?No.2所示的核苷酸序列，所述引物UidA-FIP為序列表SEQ?ID?No.3所示的核苷酸序列，所述引物UidA-BIP為序列表SEQ?ID?No.4所示的核苷酸序列，所述引物UidA-LF為序列表SEQ?ID?No.5所示的核苷酸序列，所述引物UidA-LB為序列表SEQ?ID?No.6所示的核苷酸序列；

所述引物組II由引物Stx1-F3、引物Stx1-B3、引物Stx1-FIP、引物Stx1-BIP、引物Stx1-LF和引物Stx1-LB組成；用于檢測待測物是否含有產志賀毒素1菌株。

所述引物Stx1-F3為序列表SEQ?ID?No.7所示的核苷酸序列，所述引物Stx1-B3為序列表SEQ?ID?No.8所示的核苷酸序列，所述引物Stx1-FIP為序列表SEQ?ID?No.9所示的核苷酸序列，所述引物Stx1-BIP為序列表SEQ?ID?No.10所示的核苷酸序列，所述引物Stx1-LF為序列表SEQ?ID?No.11所示的核苷酸序列，所述引物Stx1-LB為序列表SEQ?ID?No.12所示的核苷酸序列；