[發明專利]基因工程化的噬菌體

在審

• 申請號: 201980100474.4
• 申請日: 2019-07-18
• 公開（公告）號: CN114502726A
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 史蒂文·特里奧特
• 申請（專利權）人: 噬菌體技術公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/33;C12N15/90;C12N15/64;C12N15/63;A01N63/40;A01P1/00;A61L2/16;A61L2/18
• 代理公司: 北京之于行知識產權代理有限公司 11767
• 代理人: 何志欣

1.一種將噬菌體工程化的方法，所述方法包括：

-分離噬菌體；

-從所述噬菌體的基因組中去除所有附著基因；

-插入編碼一種或多種附著基因的第一獨特開放閱讀框，并插入編碼一種或多種用于克服細菌防御的基因的第二獨特開放閱讀框；

-將非天然附著基因插入所述第一開放閱讀框中，其中，所述非天然附著基因特異性地附著到選定的細菌。

2.如權利要求1所述的方法，其中，一種或多種用于克服細菌防御的基因是內溶素、生物膜減少劑、糖萼滲透劑，或它們的任何組合。

3.一種將噬菌體工程化的方法，所述方法包括：

-分離噬菌體；

-從所述噬菌體的基因組中去除任何附著基因；

-在所述基因組中插入多限制性酶盒；和

-將非天然附著基因插入所述盒中，其中，所述非天然附著基因特異性地附著到選定的細菌。

4.如權利要求1至3中任一項所述的方法，其中，所述的噬菌體是溶菌性的。

5.如權利要求1至4中任一項所述的方法，其中，所述去除和所述插入利用了所述噬菌體的無細胞克隆。

6.如權利要求1至5中任一項所述的方法，其進一步包括：篩選溶原性基因，以及使所述溶原性基因失活。

7.如權利要求1至6中任一項所述的方法，其中，所選的噬菌體是具有低拷貝數的溶原性基因的噬菌體。

8.如權利要求1至7中任一項所述的方法，其中，所選的噬菌體為溶菌性噬菌體、具有小基因組尺寸的噬菌體、或具有裂解革蘭氏陰性和革蘭氏陽性細菌的結構和功能基因的噬菌體、或其任何組合中的一種或多種。

9.如權利要求1至8中任一項所述的方法，其進一步包括：插入第二異源核酸序列，該序列包括編碼用于克服細菌防御的基因的第二開放閱讀框。

10.如權利要求9所述的方法，其中，所述用于克服細菌防御的基因包括生物膜降解基因、糖萼降解基因、編碼抗菌蛋白的基因或破壞細菌壁的酶的基因中的一種或多種，以產生突變體噬菌體。

11.如權利要求10所述的方法，其中，所述破壞細菌壁的酶的基因是內溶素。

12.如權利要求11所述的方法，其中，所述內溶素包括SEQ ID No:138；SEQ ID No:139；SEQ ID No:140；SEQ ID No:141；SEQ ID No:142；或SEQ ID No:143；或前述序列的片段的核苷酸序列。

13.如權利要求10所述的方法，其中，所述破壞細菌壁的酶的基因包括SEQ ID No:144或其片段的核苷酸序列。

14.如權利要求10所述的方法，其中，所述生物膜降解基因和糖萼降解基因包括以下中的一種或多種：Cathelicidin抗菌肽LL-37；組胺素3(HTN3)；乳酸鏈球菌肽；Dispersin B(β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶)；內切-1,4-β-葡聚糖酶(callulase)；葡萄球菌金屬蛋白酶(Aureolysin)；NucB；絲氨酸蛋白酶(SspA)；LapG蛋白酶；蜂毒肽；內切-1,4-β-甘露糖苷酶(manA)；或α-淀粉酶，或其片段。

15.如權利要求10所述的方法，其中，所述破壞細菌壁的酶的基因是靶向細菌細胞壁中的連接化學成分的基因。