[發(fā)明專利]用于治療家族性高膽固醇血癥的基因療法

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• 申請日: 2019-12-19
• 公開（公告）號: CN113710808A
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發(fā)明（設計）人: D·J·拉德
• 申請（專利權）人: 賓夕法尼亞州大學信托人
• 主分類號: C12N15/86
• 分類號: C12N15/86;A61P3/06;A61K48/00;C07K14/705
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 黃登高;初明明

1.一種用于治療家族性高膽固醇血癥(FH)的方案，所述方案包括向患者施用包括重組腺相關病毒(rAAV)病毒顆粒的懸浮液，所述rAAV病毒顆粒包括包裝在AAV8衣殼中的載體基因組，其中所述載體基因組包括AAV反向末端重復序列(ITR)和可操作地連接到肝臟特異性啟動子的對人低密度脂蛋白(LDL)受體(hLDLR)進行編碼的核酸序列，其中所述懸浮液以所述患者的每千克(kg)體重約2.5×10¹³個基因組拷貝(GC)的所述rAAV病毒顆粒的劑量施用于所述患者，并且其中所述基因組拷貝通過優(yōu)化的定量聚合酶鏈反應(oqPCR)或數字液滴聚合酶鏈反應(ddPCR)確定。

2.根據權利要求1所述的方案，其進一步包括用類固醇治療所述患者。

3.根據權利要求1或2所述的方案，其中所述懸浮液是進一步包括調配緩沖液的水溶液，所述調配緩沖液包括磷酸鹽緩沖鹽水。

4.根據權利要求1到3中任一項所述的方案，其中所述懸浮液包括濃度或效價為至少1×10¹³GC/ml的所述rAAV病毒顆粒。

5.根據權利要求1到4中任一項所述的方案，其中所述rAAV病毒顆粒至少約95％不含空衣殼。

6.根據權利要求1到5中任一項所述的方案，其中所述rAAV病毒顆粒具有介于0:4到1:4之間的空衣殼與完整顆粒的比率，包含端點和其間的任何比率。

7.根據權利要求1到6中任一項所述的方案，其中5×10¹¹GC/kg劑量的所述rAAV病毒顆粒將純合性家族性高膽固醇血癥(HoFH)的雙敲除(DKO)LDLR-/-Apobec-/-小鼠模型中的基線膽固醇水平降低25％到75％。

8.根據權利要求1到7中任一項所述的方案，其中所述肝臟特異性啟動子是甲狀腺素結合球蛋白(TBG)啟動子。

9.根據權利要求8所述的方案，其中所述TBG啟動子是人TBG啟動子。

10.根據權利要求1到9中任一項所述的方案，其中hLDLR核酸序列包括SEQ ID NO:2或4的序列或SEQ ID NO:6的核苷酸(nt)969到nt 3551。

11.根據權利要求1到10中任一項所述的方案，其中所述載體基因組進一步包括內含子、增強子和polyA信號中的一個或多個。

12.根據權利要求11所述的方案，其中所述增強子是α1微球蛋白/雙庫尼茨抑制劑(bikunin)增強子(αmic/bik)增強子。

13.根據權利要求11或12所述的方案，其中所述polyA信號是兔β球蛋白polyA。

14.根據權利要求1到13中任一項所述的方案，其中所述載體基因組包括SEQ ID NO:6的核苷酸(nt)1到nt 3947的序列。

15.根據權利要求1到14中任一項所述的方案，其中所述懸浮液進一步包括表面活性劑。

16.根據權利要求15所述的方案，其中所述表面活性劑是泊洛沙姆。

17.根據權利要求15或16所述的方案，其中所述表面活性劑以所述懸浮液的約0.0005％到約0.001％的濃度存在。

18.根據權利要求1到權利要求17中任一項所述的方案，其中所述懸浮液的pH范圍為6.5到8或7到7.5。