[發(fā)明專利]含有固定化免疫球蛋白和脂質(zhì)基抗原的硝化纖維素片材及其用途

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• 申請日: 2019-12-10
• 公開（公告）號: CN113412427A
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: J·T·卡斯特羅普
• 申請（專利權(quán)）人: 凱儀國際有限公司;欣日知識產(chǎn)權(quán)有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/569
• 代理公司: 上海專利商標事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 蔡文清;錢文宇

本發(fā)明涉及硝化纖維素片材，其包含固定化抗體和脂質(zhì)基抗原。本發(fā)明還涉及一種試劑盒，其包含所述硝化纖維素片材。本發(fā)明還涉及所述片材的用途，特別是在檢測指示感染的抗體的方法中的用途。

本發(fā)明涉及硝化纖維素片材，其包含固定化抗體和脂質(zhì)基抗原。本發(fā)明還涉及一種試劑盒，其包含所述硝化纖維素片材。本發(fā)明還涉及所述片材的用途，特別是在檢測指示感染的抗體的方法中的用途。

緒論

許多感染原(例如細菌、病毒和真菌)會產(chǎn)生抗原，這些抗原會引起受感染對象的免疫反應(yīng)。該免疫反應(yīng)伴隨著針對這些抗原的特異性抗體的產(chǎn)生。因此，這些抗體是感染原(infectious agent)感染的指示。

許多抗原暴露在感染原的外表面上或從感染原的外表面排出。一類特別重要的抗原是脂質(zhì)基抗原(lipid based antigen)，因為許多脂質(zhì)基抗原能夠引發(fā)強免疫反應(yīng)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明利用由脂質(zhì)抗原引發(fā)的強免疫反應(yīng)(potent immune response)，用于診斷。具體來說，在本發(fā)明中，固定化脂質(zhì)抗原用于檢測源自疑似受感染原感染的對象的樣品中的抗體。這樣就可以診斷出具有特定感染的對象。

感染性疾病的診斷通常涉及復(fù)雜、昂貴且耗時的測試，并且通常需要專門的實驗室。

此外，常規(guī)實驗室測試(例如，ELISA)需要大量抗原，這些抗原的量通常難以純化或合成。因此，需要提供一種需要較少抗原的測試。

此外，常規(guī)測試僅診斷對象是否感染了特定感染原，而不能給出感染階段的指示。

本發(fā)明旨在解決這些問題。

在第一方面中，本發(fā)明涉及一種硝化纖維素片材，其包含固定至硝化纖維素片材不同位置的如下物質(zhì)：免疫球蛋白G；免疫球蛋白M；以及至少一種脂質(zhì)基抗原，所述抗原能夠結(jié)合響應(yīng)于對象體內(nèi)感染原的感染而產(chǎn)生的抗體。

在第二方面中，本發(fā)明涉及一種試劑盒，其包括：根據(jù)本發(fā)明第一方面的硝化纖維素片材，并且還包括：含有具有偶聯(lián)檢測標記物的抗IgG二抗的容器；以及含有具有偶聯(lián)檢測標記物的抗IgM二抗的容器。

在第三方面中，本發(fā)明涉及檢測指示感染的抗體的方法，其包括：將至少一張如本發(fā)明第一方面所述的片材暴露于源自疑似受感染的對象的樣品；通過用選自抗IgM二抗或抗IgG二抗的具有偶聯(lián)檢測標記物的二抗孵育來確定樣品中是否存在與固定在片材上的抗原結(jié)合的一抗；以及檢測二抗與所述一抗的結(jié)合，其中所述一抗與固定在片材上的抗原結(jié)合，其中，所述一抗與二抗的結(jié)合導(dǎo)致陽性信號，其中，用抗IgM二抗孵育時的陽性信號表示感染早期，而用抗IgG二抗孵育時的陽性信號表示感染后期。

在第四方面中，本發(fā)明還涉及如第一方面所述的片材的用途，用于區(qū)分感染早期和感染后期和/或用于區(qū)分活動性和非活動性感染。

本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)可以將脂質(zhì)衍生的抗原和免疫球蛋白固定在同一硝化纖維素片材上。對脂質(zhì)抗原的強免疫反應(yīng)可以獲得強檢測信號并獲得可靠結(jié)果。重要的是，將脂質(zhì)抗原固定在硝化纖維素上僅需要有限量的抗原，這很重要，因為抗原的純化和合成通常既耗時又昂貴。例如，僅0.2ng的固定化抗原就足以獲得良好的信號，而常規(guī)技術(shù)(例如ELISA)需要250μg每96孔板。因此，本發(fā)明提供了所需抗原量的重要減少。

這些片材易于在檢測指示感染的抗體的方法中使用，不需要復(fù)雜、昂貴且耗時的測試和專門實驗室。在這方面，本發(fā)明的試劑盒包括用于實施本發(fā)明方法的部件，而無需昂貴且專門的設(shè)備和從業(yè)者，例如，研究人員將僅需要標準實驗室設(shè)備。這使得本發(fā)明適用于診斷，但也適用于不旨在診斷感染的研究目的。