[發(fā)明專利]用于產(chǎn)生生物視黃醇的微生物和使用其產(chǎn)生生物視黃醇的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201980090783.8 | 申請日： | 2019-11-29 |
| 公開（公告）號： | CN113490744A | 公開（公告）日： | 2021-10-08 |
| 發(fā)明（設計）人： | B·J·于;I·S·張;J·Y·張 | 申請（專利權(quán)）人： | 比奧斯普拉希有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/81 | 分類號： | C12N15/81;C12P23/00;C12N9/04;C12N9/02;C12N9/10 |
| 代理公司： | 北京市中咨律師事務所 11247 | 代理人： | 胡志君;黃革生 |
| 地址： | 韓國*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 產(chǎn)生 生物 視黃醇 微生物 使用 方法 | ||
本發(fā)明涉及產(chǎn)視黃醇微生物，所述微生物中引入了視黃醇生物合成基因；和涉及用于產(chǎn)生視黃醇的方法，所述方法包括培養(yǎng)所述微生物的步驟。本發(fā)明的微生物具有改善的產(chǎn)視黃醇能力，并且因此它可以有效地用于產(chǎn)生視黃醇，且基于產(chǎn)生視黃醇的方法，所述方法包括培養(yǎng)微生物的步驟，可以改善視黃醇產(chǎn)生效率。
發(fā)明背景
1.技術(shù)領域
本發(fā)明涉及用于產(chǎn)生生物視黃醇的微生物，其中引入β-胡蘿卜素生物合成基因和視黃醇生物合成基因；和產(chǎn)生視黃醇的方法，所述方法包括培養(yǎng)微生物的步驟。
2.相關技術(shù)的描述
視黃醇是具有抗皺作用和抗氧化作用的高價值添加原料。具體而言，視黃醇及其衍生物，作為有助改善皮膚皺紋的成分，是提供優(yōu)異的皺紋改善效能的原料，從而它們構(gòu)成在食品藥品安全部簽發(fā)的通報中作為功能性化妝品原料所列示的四種成分中的三者。因此，具有上述功能的視黃醇可以用作具有抗皺效果的化妝組合物。
但是，盡管視黃醇有這種效能，不易大量生產(chǎn)視黃醇。產(chǎn)生視黃醇的現(xiàn)有代表性方法是從天然資源提取前體后通過戊二烯→視黃醛→視黃醇的化學反應產(chǎn)生終產(chǎn)物視黃醇及其衍生物。但是，借助這種化學過程的方法具有3,500至4,000美元/kg的生產(chǎn)成本，這造成含視黃醇產(chǎn)品的生產(chǎn)成本增加的問題。因此，為了實現(xiàn)更穩(wěn)定生產(chǎn)和高產(chǎn)率，需要借助生物工藝的高效的視黃醇生產(chǎn)技術(shù)。
本發(fā)明人已經(jīng)作出諸多努力來增加視黃醇生產(chǎn)，并且作為結(jié)果，他們開發(fā)了能夠以高效率更穩(wěn)定產(chǎn)生視黃醇的微生物，并且通過在多種條件下培養(yǎng)微生物確認視黃醇的產(chǎn)生量增加，由此完成了本發(fā)明。當通過本發(fā)明的酵母發(fā)酵工藝產(chǎn)生視黃醇時，安全性高，原因是使用生態(tài)友好型和安全的酵母株。與現(xiàn)有生產(chǎn)技術(shù)相比，本發(fā)明的酵母發(fā)酵工藝還預計改善價格競爭性，因為高效率生產(chǎn)因使用多拷貝質(zhì)粒進行BMCO表達而成為可能。
發(fā)明概述
本發(fā)明的一個目的是提供一種產(chǎn)視黃醇微生物，其中香葉基香葉基二磷酸合酶(GGPP合酶，crtE)、八氫番茄紅素合酶(crtYB)、去飽和酶(crtI)、β-胡蘿卜素15,15′-單加氧酶(β-胡蘿卜素15,15′-單加氧酶，BCMO)和視黃醇脫氫酶(ybbO)蛋白質(zhì)活性增強。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種產(chǎn)生視黃醇的方法，所述方法包括在培養(yǎng)基中培養(yǎng)微生物的步驟。
附圖簡述
圖1顯示視黃醇的生物合成代謝途徑的設計；
圖2顯示確認crtE(A)基因、crtI(B)基因和crtYB(C)基因整合的SDS-PAGE；
圖3顯示確認BCMO-SR基因或BCMO-blh基因整合的PCR結(jié)果；
圖4顯示確認整合BCMO-SR或BCMO-blh基因的菌落形成(A)和主菌落形成(B)；
圖5顯示確認BCMO-SR(A)或BCMO-blh(B)基因整合的SDS-PAGE；
圖6顯示確認yybO基因整合的PCR結(jié)果；
圖7顯示測量本發(fā)明已轉(zhuǎn)化菌株的視黃醛(A)和視黃醇(B)產(chǎn)生量的HPLC/UV色譜分析；
圖8顯示測量野生型菌株(A)和本發(fā)明已轉(zhuǎn)化菌株(B)的視黃醇產(chǎn)生量的ESI-質(zhì)譜圖；
圖9顯示測量當使用單拷貝質(zhì)粒和多拷貝質(zhì)粒引入BMCO基因時視黃醇產(chǎn)生量的HPLC圖；和
圖10顯示當使用單拷貝質(zhì)粒或多拷貝質(zhì)粒時視黃醇產(chǎn)生的定量比較結(jié)果的圖。
優(yōu)選實施方案詳述
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