[發(fā)明專利]用于離體擴(kuò)增自然殺傷細(xì)胞的方法及其用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201980089617.6
• 申請日: 2019-11-21
• 公開（公告）號: CN113316455A
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: E·施帕爾;K·雷茲瓦尼
• 申請（專利權(quán)）人: 得克薩斯大學(xué)體系董事會
• 主分類號: A61K35/17
• 分類號: A61K35/17;C12N5/0783
• 代理公司: 中國貿(mào)促會專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 11038
• 代理人: 陳曉娜

1.一種用于擴(kuò)增自然殺傷(NK)細(xì)胞的離體方法，所述方法包括：

(a)從臍帶血獲得單核細(xì)胞(MNC)的起始群體；

(b)在抗原呈遞細(xì)胞(APC)和IL-2存在下刺激所述MNC；以及

(c)用APC再刺激所述細(xì)胞以產(chǎn)生經(jīng)擴(kuò)增的NK細(xì)胞，其中所述方法在生物反應(yīng)器中進(jìn)行并且符合良好作業(yè)規(guī)范(GMP)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述方法進(jìn)一步包含耗盡CD3陽性的細(xì)胞。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述耗盡在步驟(b)與(c)之間進(jìn)行。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中從生物反應(yīng)器移出所述細(xì)胞。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中從臍帶血獲得MNC的起始群體包括在葡聚糖、人血清白蛋白(HSA)、DNA酶和/或氯化鎂存在下解凍臍帶血。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中從臍帶血獲得MNC的起始群體包括在葡聚糖和DNA酶存在下解凍臍帶血。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中在10％葡聚糖存在下洗滌所述臍帶血。

8.根據(jù)權(quán)利要求5或7所述的方法，其中在氯化鎂存在下使所述臍帶血懸浮。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述氯化鎂的濃度為200mM。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項所述的方法，其中獲得包括進(jìn)行ficoll密度梯度離心以獲得單核細(xì)胞(MNC)。

11.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項所述的方法，其中所述方法不包括在步驟(b)期間移除或添加任何培養(yǎng)基組分。

12.根據(jù)權(quán)利要求1-11中任一項所述的方法，其中所述生物反應(yīng)器是透氣式生物反應(yīng)器。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述透氣式生物反應(yīng)器是G-Rex100M。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中步驟(b)的刺激在3-5L的培養(yǎng)基中進(jìn)行。

15.根據(jù)權(quán)利要求1-13中任一項所述的方法，其中所述APC經(jīng)γ輻照。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述APC經(jīng)工程改造以表達(dá)膜結(jié)合的IL-21(mbIL-21)。

17.根據(jù)權(quán)利要求1-16中任一項所述的方法，其中所述APC經(jīng)工程改造以表達(dá)IL-21、IL-15、IL-7、IL-18和/或IL-2。

18.根據(jù)權(quán)利要求1-16中任一項所述的方法，其中所述MNC和APC以1:2的比率進(jìn)行培養(yǎng)。

19.根據(jù)權(quán)利要求1-18中任一項所述的方法，其中所述IL-2的濃度為50-200IU/mL。

20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述IL-2的濃度為100IU/mL。

21.根據(jù)權(quán)利要求1-20中任一項所述的方法，其中每2-3天補(bǔ)給IL-2。

22.根據(jù)權(quán)利要求1-20中任一項所述的方法，其中進(jìn)行步驟(b)持續(xù)6-8天。

23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中進(jìn)行步驟(b)持續(xù)7天。