[發明專利]在微流體環境中測定生物細胞的方法

在審

• 申請號: 201980087615.3
• 申請日: 2019-11-01
• 公開（公告）號: CN113366312A
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: Y·布朗韋茨基;A·莫西亞羅;G·K·斯塔德勒;P·J·比米勒;N·C·馬克斯;D·史密斯;V·H·T·派;J·M·麥克尤恩;A·L·古德塞爾;J·A·坦尼;T·M·維特利;H·E·金
• 申請（專利權）人: 伯克利之光生命科技公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50
• 代理公司: 隆天知識產權代理有限公司 72003
• 代理人: 吳小瑛;于磊

1.一種檢測由微流體設備腔室內的生物細胞分泌的第一目標生物分子的方法，所述方法包括：

將所述生物細胞放置在所述微流體設備的腔室內；

將第一微物體放置在所述微流體設備的腔室內或腔室附近，其中所述第一微物體包括與第一目標分子結合的第一結合劑；

在足以允許生物細胞將第一目標分子分泌到腔室內并且使分泌的第一目標分子擴散并結合到第一微物體的條件下，將生物細胞與第一微物體一起溫育；和

檢測第一目標分子與第一微物體的結合，其中檢測結合包括：

接收所述微流體設備中目標區域的第一圖像和一個或多個第二圖像；

預處理所述第一圖像和所述一個或多個第二圖像以減少圖像數據中的異常；

對所述一個或多個第二圖像中的每一個進行變換以將所述第二圖像與所述第一圖像光學對準；

使用機器學習算法處理所述第一圖像中的像素數據以檢測存在于所述目標區域中的微物體，其中檢測每個微物體包括識別所述微物體的邊界；以及

檢測位于所述一個或多個第二圖像的每一個中的每個檢測到的微物體的每個邊界內的信號。

2.根據權利要求1所述的方法，其中檢測結合是根據實施方式201至262中任一項的方法進行的。

3.根據權利要求1所述的方法，其中所述生物細胞是免疫細胞。

4.根據權利要求3所述的方法，其中所述免疫細胞是T細胞。

5.根據權利要求3所述的方法，其中所述免疫細胞是記憶B細胞或漿細胞。

6.根據權利要求1所述的方法，其中微流體設備的腔室是隔離塢，其包括隔離區域和連接區域，其中連接區域將隔離區域流體連接至微流體設備的流動區域，并且其中隔離區域是微流體設備的未掃過區域。

7.根據權利要求6所述的方法，其中隔離塢的隔離區域具有通向連接區域的單個開口。

8.根據權利要求6所述的方法，其中隔離塢的連接區域具有通向微流體設備的流動區域的近端開口和通向隔離區域的遠端開口，其中連接區域的近端開口的寬度W_con為大約20微米至大約100微米，并且其中從近端開口到遠端開口的連接區域的長度L_con是近端開口的寬度Wcon的至少1.0倍。

9.根據權利要求6所述的方法，其中從近端開口到遠端開口的連接區域的長度L_con為大約20微米至大約500微米；其中在連接區域的近端開口處的流動區域的高度Hc_h為大約20微米至大約100微米；和/或其中在連接區域的近端開口處的流動區域的寬度W_ch為大約50微米至大約500微米。

10.根據權利要求1或3至9中任一項所述的方法，其中將所述生物細胞放置在微流體設備的腔室內，包括從生物細胞群中選擇所述生物細胞并將所選擇的生物細胞移至腔室內。

11.根據權利要求10所述的方法，其中所述生物細胞至少部分地基于一種或多種物理特性來選擇。

12.根據權利要求10所述的方法，其中所述生物細胞至少部分地基于一種或多種表面標記物的表達來選擇。

13.根據權利要求12所述的方法，其中所述一種或多種表面標記物是CD3、CD4、CD8、CD137或其任何組合。

14.根據權利要求1或3至9中任一項所述的方法，其中放置第一微物體包括將第一微物體放置在微流體設備的腔室內。

15.根據權利要求1或3至9中任一項所述的方法，其中第一微物體的第一結合劑包括蛋白質。