[發(fā)明專利]集成工作流中低拷貝數(shù)核酸的增強(qiáng)的檢測(cè)

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201980087320.6
• 申請(qǐng)日: 2019-11-18
• 公開（公告）號(hào): CN113544281A
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: M·海森頓克斯
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 拜奧卡蒂斯生物股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6806
• 分類號(hào): C12Q1/6806
• 代理公司: 中國(guó)貿(mào)促會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 11038
• 代理人: 張小勇

1.一種在包括提取室和擴(kuò)增室的自動(dòng)化系統(tǒng)中檢測(cè)低拷貝數(shù)核酸的方法，所述方法包括：

-向自動(dòng)化系統(tǒng)的提取室提供包含低拷貝數(shù)核酸的樣品，所述提取室包括用于DNA吸附的二氧化硅表面并且與加熱器相鄰；

-將核酸吸附至二氧化硅表面；

-在二氧化硅表面的存在下進(jìn)行核酸的預(yù)擴(kuò)增；

-從二氧化硅表面洗脫預(yù)擴(kuò)增的核酸；

-將預(yù)擴(kuò)增的核酸運(yùn)輸至自動(dòng)化系統(tǒng)的擴(kuò)增室，所述擴(kuò)增室與提取室流體連接；

-在所述擴(kuò)增室中擴(kuò)增預(yù)擴(kuò)增的核酸；

其中

自動(dòng)化系統(tǒng)被配置為

將預(yù)擴(kuò)增反應(yīng)僅定位在二氧化硅表面的占據(jù)提取室的與加熱器相鄰的區(qū)域的部分，并且

在提取室內(nèi)的二氧化硅表面的剩余部分保持基本上沒有預(yù)擴(kuò)增反應(yīng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中通過壓力控制來完成定位。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中預(yù)擴(kuò)增包括在最高溫度與最低溫度之間的對(duì)稱熱循環(huán)。

4.根據(jù)前述權(quán)利要求中的任一項(xiàng)所述的方法，其中將最高溫度和最低溫度各自保持至少30秒，優(yōu)選至少45秒，最優(yōu)選至少1分鐘。

5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中通過使生物樣品與羥基磷灰石固體支持物接觸獲得包含低拷貝數(shù)核酸的樣品。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中生物樣品與羥基磷灰石固體支持物的接觸是在Na⁺、Li⁺或Mg²⁺陽離子的存在下進(jìn)行的。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中包含低拷貝數(shù)核酸的樣品是用優(yōu)選包含KHPO₄的磷酸鹽緩沖液洗脫捕獲到羥基磷灰石固體支持物上的核酸的結(jié)果。

8.根據(jù)權(quán)利要求5-7中任一項(xiàng)所述的方法，其中生物樣品是體液。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中體液選自血漿、血清、血液、尿液、CSF、膽汁、唾液。

10.一種在自動(dòng)化系統(tǒng)中檢測(cè)低拷貝數(shù)核酸的方法，所述方法包括：

-使生物樣品與羥基磷灰石(HAP)固體支持物接觸以獲得包含低拷貝數(shù)核酸的樣品；

-將包含低拷貝數(shù)核酸的樣品提供給自動(dòng)化系統(tǒng)的提取室，所述提取室包括用于DNA吸附的二氧化硅表面；

-將核酸吸附至二氧化硅表面；和

-在自動(dòng)化系統(tǒng)中擴(kuò)增核酸。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中生物樣品與羥基磷灰石固體支持物的接觸是在Na⁺、Li⁺或Mg²⁺陽離子的存在下進(jìn)行的。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中包含低拷貝數(shù)核酸的樣品是用優(yōu)選包含KHPO₄的磷酸鹽緩沖液洗脫捕獲到羥基磷灰石固體支持物上的核酸的結(jié)果。

13.根據(jù)權(quán)利要求10至14中任一項(xiàng)所述的方法，其中在擴(kuò)增步驟之前，對(duì)吸附至二氧化硅表面的核酸進(jìn)行預(yù)擴(kuò)增，并且任選地洗脫預(yù)擴(kuò)增的核酸并將預(yù)擴(kuò)增的核酸運(yùn)輸至自動(dòng)化系統(tǒng)的擴(kuò)增室，所述擴(kuò)增室與提取室流體連接。

14.根據(jù)權(quán)利要求10至14中任一項(xiàng)所述的方法，其中生物樣品是體液。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中體液選自血漿、血清、血液、尿液、CSF、膽汁、唾液。