[發(fā)明專利]使用凋亡抗性細(xì)胞系產(chǎn)生多肽的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201980084601.6
• 申請日: 2019-12-19
• 公開（公告）號: CN113631714A
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: T·A·阿瑞納;A·W·黃
• 申請（專利權(quán)）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號: C12N15/67
• 分類號: C12N15/67;C07K14/47;C12N5/071
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務(wù)所 11494
• 代理人: 岑曉東

1.一種產(chǎn)生重組多肽的方法，其包括：

在適合產(chǎn)生所述多肽的條件下培養(yǎng)HEK293細(xì)胞系，所述HEK293細(xì)胞系包含(a)人Bax和Bak基因中的每一者中的功能喪失突變以及(b)編碼所述重組多肽的多核苷酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中編碼所述重組多肽的所述多核苷酸為染色體外多核苷酸。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中編碼所述重組多肽的所述多核苷酸被整合至所述HEK293細(xì)胞系的染色體中。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的方法，其中所述重組多肽為抗體或其抗原結(jié)合片段、抗原、酶或疫苗。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述重組多肽為抗體或其抗原結(jié)合片段。

6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項所述的方法，其中所述細(xì)胞系在7天內(nèi)以約650mg/L的效價產(chǎn)生所述重組多肽。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項所述的方法，其進一步包括從所述細(xì)胞系分離所述重組多肽。

8.一種產(chǎn)生病毒載體的方法，其包括：

在適合產(chǎn)生所述病毒載體的條件下培養(yǎng)HEK293細(xì)胞系，所述HEK293細(xì)胞系包含(a)人Bax和Bak基因中的每一者中的功能喪失突變；(b)病毒基因組；以及(c)一種或多種編碼病毒衣殼的多核苷酸。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其進一步包括從所述細(xì)胞系分離所述病毒載體。

10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項所述的方法，其中在細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述細(xì)胞系。

11.根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項所述的方法，其中在介于約6.7與約7.3之間的pH培養(yǎng)所述細(xì)胞系。

12.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項所述的方法，其中在約30％的溶解氧(DO)設(shè)定點培養(yǎng)所述細(xì)胞系。

13.根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一項所述的方法，其中在賦予約13W/m³的功率輸入/體積(P/V)的攪拌速率培養(yǎng)所述細(xì)胞系。

14.根據(jù)權(quán)利要求1至13中任一項所述的方法，其中以至少約10L的體積培養(yǎng)所述細(xì)胞系。

15.根據(jù)權(quán)利要求1至13中任一項所述的方法，其中以至少約25L的體積培養(yǎng)所述細(xì)胞系。

16.根據(jù)權(quán)利要求1至13中任一項所述的方法，其中在35L生物反應(yīng)器培養(yǎng)物中培養(yǎng)所述細(xì)胞系。

17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其包括在35L生物反應(yīng)器培養(yǎng)物中培養(yǎng)所述細(xì)胞系60天。

18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中在35L生物反應(yīng)器培養(yǎng)物中培養(yǎng)所述細(xì)胞系60天之后，所述細(xì)胞系維持至少85％細(xì)胞存活率。

19.根據(jù)權(quán)利要求16至18中任一項所述的方法，其中在所述35L生物反應(yīng)器培養(yǎng)物中以介于約20L與約35L之間的工作體積培養(yǎng)所述細(xì)胞系。

20.根據(jù)權(quán)利要求1至19中任一項所述的方法，其中在分批飼喂培養(yǎng)條件下培養(yǎng)所述細(xì)胞系。

21.根據(jù)權(quán)利要求1至19中任一項所述的方法，其中在灌流培養(yǎng)條件下培養(yǎng)所述細(xì)胞系。