[發明專利]熒光發生核酸分子以及熒光標記靶RNA的方法

在審

• 申請號: 201980079072.0
• 申請日: 2019-12-03
• 公開（公告）號: CN113166758A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 岡田康志;有吉哲郎
• 申請（專利權）人: 國立研究開發法人科學技術振興機構
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/115;C12N15/63;C12Q1/6806;C12Q1/6825;C12Q1/6876
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

1.一種熒光發生核酸分子，其特征在于，包含經由接頭序列連接有2個以上的熒光分子結合區的堿基序列，

所述熒光分子結合區在支架序列中插入有1個以上的熒光分子結合適體序列。

2.如權利要求1所述的熒光發生核酸分子，其中，所述接頭序列的長度為20個堿基以上。

3.如權利要求1或2所述的熒光發生核酸分子，其中，所述接頭序列未形成特定的立體結構。

4.如權利要求1至3中任一項所述的熒光發生核酸分子，其中，所述熒光分子結合區在所述支架序列中插入有2個以上的所述熒光分子結合適體序列。

5.如權利要求4所述的熒光發生核酸分子，其中，所述熒光分子結合區通過形成含有2個以上的環結構的莖環結構的單鏈核酸分子中的至少2個所述環結構被取代為所述熒光分子結合適體序列的結構來構成。

6.如權利要求1至5中任一項所述的熒光發生核酸分子，其中，所述熒光分子結合適體序列含有：形成以G-quadruplex結構所夾持的莖環結構的單鏈核酸分子的堿基序列；

所述莖環結構通過4～6個堿基的莖結構和4個堿基的環結構來構成。

7.如權利要求1至6中任一項所述的熒光發生核酸分子，其中，所述熒光分子結合適體序列是Broccoli、Broccoli3或dBroccoli。

8.如權利要求1至5中任一項所述的熒光發生核酸分子，其中，所述熒光分子結合區通過序列號16或17所示的堿基序列來構成。

9.如權利要求1至8中任一項所述的熒光發生核酸分子，其中，所述接頭序列通過序列號18～20中任意之一所示的堿基序列來構成。

10.如權利要求1至9中任一項所述的熒光發生核酸分子，其含有4個以上的所述熒光分子結合適體序列。

11.如權利要求1至10中任一項所述的熒光發生核酸分子，其中，所述熒光分子結合適體序列所結合的熒光分子是DFHBI家族的熒光分子。

12.一種熒光標記靶RNA的方法，其是對靶RNA進行熒光標記的方法；其中，使靶RNA直接或間接地連接權利要求1至11中任一項所述的熒光發生核酸分子之后，使其與所述熒光發生核酸分子中的所述熒光分子結合適體序列所結合的熒光分子接觸。

13.如權利要求12所述的熒光標記靶RNA的方法，其中，所述靶RNA是靶基因的轉錄產物，

向在所述靶基因的3’非翻譯區內整合有編碼所述熒光發生核酸分子的堿基序列的細胞內，導入所述熒光發生核酸分子中的所述熒光分子結合適體序列所結合的熒光分子，并使所述靶基因的轉錄產物與所述熒光分子結合。

14.一種熒光標記靶RNA的方法，其是對靶RNA進行熒光標記的方法；其中，向含有靶RNA的試樣中混合：

使與所述靶RNA的一部分雜交的探針直接或間接地連接于權利要求1至11中任一項所述的熒光發生核酸分子而成的核酸分子，以及

所述核酸分子中的所述熒光分子結合適體序列所結合的熒光分子。

15.一種載體，其具有：

控制外源基因的表達的啟動子；

位于所述啟動子的下游并且用于插入所述外源基因的編碼區的限制性酶切位點；以及

位于所述限制性酶切位點的下游的3’非翻譯區，

所述3’非翻譯區包含編碼權利要求1至11中任一項所述的熒光發生核酸分子的堿基序列。