[發明專利]使用具有完全或部分缺失的whiB4基因的物種谷氨酸棒桿菌的L-賴氨酸分泌細菌發酵生產L-賴氨酸的方法

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• 申請號: 201980078782.1
• 申請日: 2019-11-27
• 公開（公告）號: CN113166787A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: G·蒂爾巴赫;F·施耐德;K·福斯;T·貝克爾
• 申請（專利權）人: 贏創運營有限公司
• 主分類號: C12P13/08
• 分類號: C12P13/08
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 柴麗敏

本發明基本上涉及一種使用具有完全或部分缺失的whiB4基因的物種谷氨酸棒桿菌的L?賴氨酸分泌細菌發酵生產L?賴氨酸的方法。

L-賴氨酸用于人類醫學、制藥工業、食品工業、以及特別用于動物營養。

L-賴氨酸是通過物種谷氨酸棒桿菌(Corynebacterium glutamicum)菌株的發酵產生的。由于經濟上的重要性，正在不斷進行改善生產方法的工作。改善可能涉及發酵技術，例如攪拌和供應氧氣，或涉及營養培養基的組合物，例如發酵過程中的糖濃度，或涉及將發酵液通過例如干燥和造粒發酵液或離子交換色譜加工成合適的產品形式，或者可能涉及微生物本身的固有性能特性。

用于改善這些微生物的性能特性的方法是那些誘變、選擇和篩選突變體的方法。多年來，通過修飾(即增強或減弱)單個涉及L-賴氨酸生物合成的基因并研究對L-賴氨酸生產的影響，重組DNA技術的方法同樣用于改善物種谷氨酸棒桿菌的產L-賴氨酸菌株。

已經分別公開了各種細菌或物種谷氨酸棒桿菌菌株的染色體的核苷酸序列，以及它們的分析。該信息可在公共可訪問的數據庫中獲得，并可用于菌株開發目的。一個這樣的數據庫是NCBI(National Center for Biotechnology Information，U.S.NationalLibrary of Medicine 8600Rockville Pike，Bethesda MD，20894USA)的GenBank數據庫。

在針對生物體測序的染色體注釋過程期間，通過向數據庫提供信息的提供者，向鑒定的結構例如基因或編碼序列提供稱為locus_tag的唯一標識符。

谷氨酸棒桿菌(Corynebacterium glutamicum)ATCC13032染色體的核苷酸序列及其分析由Ikeda and Nakagawa(Applied Microbiology and Biotechnology 62,99-109(2003))描述并在EP1108790中描述。該信息可在NCBI以登錄號NC_003450獲得。在以登錄號NC_003450公開的染色體序列中，locus_tag NCgl0275標識了編碼調節蛋白的核苷酸序列。還注釋了該蛋白與轉錄因子WhiB相似。多肽的氨基酸序列以標識符NP_599532可得。

在EP1108790中，在序列311下公開了編碼序列。在SEQ ID NO:3811下公開了相應的氨基酸序列。

locus_tag NCgl0275的核苷酸序列和EP1108790的序列311是相同的。

Kalinowski等人獨立地描述了谷氨酸棒桿菌ATCC13032染色體的核苷酸序列及其分析(Journal of Biotechnology 104(1-3),5-25(2003))。該信息可在NCBI以登錄號NC_006958獲得。Locus_tag CGTRNA_RS01480標識了編碼描述為WhiB家族轉錄調節因子的基因產物的核苷酸序列。本領域中也使用了old_locus_tag名稱cg0337。多肽的氨基酸序列以標識符WP_003863319可得。

locus_tag NCgl0275和CGTRNA_RS01480的核苷酸序列是相同的。

有關由old_locus_tag cg0337標識的基因的轉錄信號的信息，可參見Pfeifer-Sancar等人(BMC Genomics 14:888(2013))。

Choi等人鑒定出NCgl0275基因產物為谷氨酸棒桿菌的WhiB樣蛋白，并將該基因命名為whcA(FEMS Microbiology Letters 290,32-38(2009))。Choi等人表明，whcA基因在谷氨酸棒桿菌的氧化應激反應中起負面作用。在這些研究期間，Choi等人在菌株AS019E12的whcA基因內構建了一個缺失。菌株AS019E12源自ATCC13059(參見：Follettie et al.；Journal of Bacteriology 175(13),4096-4103(1993))。