[發明專利]重新定向AAV衣殼的嗜性

在審

• 申請號: 201980078363.8
• 申請日: 2019-10-02
• 公開（公告）號: CN113166208A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: M·E·農嫩馬赫;侯金兆;王偉;K·安達
• 申請（專利權）人: 沃雅戈治療公司
• 主分類號: C07K14/005
• 分類號: C07K14/005;C12N15/10;C12N15/86
• 代理公司: 隆天知識產權代理有限公司 72003
• 代理人: 付文川;吳小瑛

1.一種產生變體AAV衣殼多肽的方法，其中相對于親本AAV衣殼多肽，所述變體AAV衣殼多肽表現出改善的轉導或增加的細胞或組織特異性中的至少一種，所述方法包括：

a)產生變體AAV衣殼多肽的文庫，其中所述文庫包括

i)具有2、3、4、5、6、7、8或9個連續氨基酸的隨機化序列區的多個衣殼多肽，或

ii)來自多于一個親本AAV衣殼多肽的多個衣殼多肽；

b)通過將文庫(i)或(ii)的衣殼多肽克隆到AAV載體中來產生AAV載體文庫，其中所述AAV載體包括第一啟動子和第二啟動子，其中所述第二啟動子在沒有輔助病毒共感染的情況下驅動衣殼mRNA表達。

2.如權利要求1所述的方法，其中第一啟動子是AAV2 P40，并且第二啟動子是遍在啟動子。

3.如權利要求1所述的方法，其中第一啟動子是AAV2 P40，并且第二啟動子是細胞類型特異性啟動子。

4.如權利要求2或權利要求3所述的方法，其中啟動子選自表3中列出的任何啟動子。

5.如權利要求4所述的方法，其中遍在啟動子或細胞特異性啟動子允許編碼衣殼多肽的RNA的表達。

6.如權利要求5所述的方法，還包括回收編碼衣殼多肽的所述RNA并確定所述衣殼多肽的序列。

7.如權利要求6所述的方法，其中與親本衣殼多肽相比，回收的衣殼多肽表現出增加的靶細胞轉導或靶細胞特異性(嗜性)。

8.如權利要求7所述的方法，其中靶細胞是神經元細胞、神經干細胞、星形膠質細胞、少突膠質細胞、小膠質細胞、視網膜細胞、腫瘤細胞、造血干細胞、產生胰島素的β細胞、肺上皮細胞、內皮細胞、肝細胞、骨骼肌細胞、肌肉干細胞、肌肉衛星細胞或心肌細胞。

9.如權利要求1所述的方法，其中所述AAV載體包含第一啟動子和第二啟動子，其中所述第二啟動子位于衣殼基因的下游并在沒有輔助病毒共感染的情況下驅動其反義RNA表達。

10.如權利要求9所述的方法，其中第一啟動子是AAV2 P40，并且第二啟動子是遍在啟動子。

11.如權利要求9所述的方法，其中第一啟動子是AAV2 P40，并且第二啟動子是細胞特異性啟動子。

12.如權利要求10或權利要求11所述的方法，其中遍在啟動子或細胞特異性啟動子允許以反義方向表達編碼變體AAV的衣殼多肽的基因，從而產生反義RNA。

13.如權利要求12所述的方法，其中所述方法還包括回收所述反義RNA，所述反義RNA可以轉化為編碼用于確定所述變體AAV衣殼多肽的序列的所述變體AAV衣殼多肽的RNA。

14.如權利要求13所述的方法，其中與親本衣殼多肽相比，所述變體衣殼多肽表現出增加的靶細胞轉導或靶細胞特異性(嗜性)。

15.如權利要求14所述的方法，其中靶細胞是神經元細胞、神經干細胞、星形膠質細胞、少突膠質細胞、小膠質細胞、視網膜細胞、腫瘤細胞、造血干細胞、產生胰島素的β細胞、肺上皮細胞、內皮細胞、肝細胞、骨骼肌細胞、肌肉干細胞、肌肉衛星細胞或心肌細胞。