[發(fā)明專利]用于純化信使RNA的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201980070381.1
• 申請(qǐng)日: 2019-08-26
• 公開（公告）號(hào): CN112930396A
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: J·帕萊拉;K·吉利斯;J·阿比薩爾;T·讓諾特;E·黑爾德;F·德羅莎;M·希爾特萊;R·鮑威爾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 川斯勒佰爾公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10;C07H1/06;C07H21/00;C07H21/02
• 代理公司: 北京市君合律師事務(wù)所 11517
• 代理人: 黃遵玲;顧云峰

1.一種用于純化信使RNA(mRNA)的方法，所述方法包括以下步驟：

(a)從包含來自制造所述mRNA的一種或多種污染物的溶液中沉淀mRNA，以提供包含沉淀的mRNA的懸浮液；

(b)使包含所述沉淀的mRNA的所述懸浮液經(jīng)過過濾器，其中所述沉淀的mRNA被所述過濾器保留；

(c)溶解步驟(b)中被所述過濾器保留的所述沉淀的mRNA，從而允許純化的mRNA通過所述過濾器；以及

(d)從步驟(c)中回收所述純化的mRNA；

其中步驟(b)和(c)中的每一個(gè)步驟均使用常規(guī)流過濾進(jìn)行。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述制造包括所述mRNA的體外轉(zhuǎn)錄(IVT)合成。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述制造包括所述mRNA的5’-加帽的步驟。

4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述制造包括所述mRNA的3'-加尾的步驟。

5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述一種或多種污染物包含酶。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述酶是聚合酶。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述酶是加帽酶。

8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述一種或多種污染物包含鹽。

9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述一種或多種污染物包含短的異常終止的轉(zhuǎn)錄物。

10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，所述方法還包括洗滌來自步驟(b)的保留在所述過濾器上的所述沉淀的mRNA的步驟。

11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述過濾器是膜過濾器或深層過濾器。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述過濾器是深層過濾器。

13.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述過濾器具有褶狀過濾器、纏繞狀過濾器或膠囊狀過濾器的形式。

14.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述過濾器包含濾網(wǎng)。

15.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述過濾器由惰性材料制成。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述惰性材料是聚丙烯。

17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述惰性材料是改性的聚醚砜(mPES)。

18.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述惰性材料是聚醚砜(PES)。

19.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述惰性材料是聚偏二氟乙烯(PVDF)。

20.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述惰性材料是纖維素。

21.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述惰性材料是硅藻土。

22.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述惰性材料是聚四氟乙烯(PTFE)。

23.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述惰性材料是硝化纖維素。