[發明專利]包含聚肌氨酸的RNA顆粒

在審

• 申請號: 201980064679.1
• 申請日: 2019-09-30
• 公開（公告）號: CN112867509A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 馬蒂亞斯·巴爾茨;本亞明·韋伯;海因里希·哈斯;菲利普·赫勒;薩拉·諾蓋拉;安妮·施萊格爾
• 申請（專利權）人: 約翰內斯·古滕伯格美因茲大學;生物技術RNA制藥有限公司
• 主分類號: A61K47/34
• 分類號: A61K47/34;A61K48/00;A61K31/195;C07K1/06;C08G69/10
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 鄭斌;劉振佳

本公開內容涉及用于在施用之后，特別是在腸胃外施用例如靜脈內、肌內、皮下或瘤內施用之后將RNA遞送至靶組織的RNA顆粒，以及包含這樣的RNA顆粒的組合物。在一個實施方案中，所述RNA顆粒包含單鏈RNA，例如編碼目的肽或蛋白質(例如藥物活性肽或蛋白質)的mRNA。RNA被靶組織的細胞吸收，并且RNA被翻譯成可表現出其生理活性的編碼的肽或蛋白質。

技術領域

本公開內容涉及用于在施用之后，特別是在腸胃外施用例如靜脈內、肌內、皮下或瘤內施用之后將RNA遞送至靶組織的RNA顆粒，以及包含這樣的RNA顆粒的組合物。在一個實施方案中，所述RNA顆粒包含單鏈RNA，例如編碼目的肽或蛋白質(例如藥物活性肽或蛋白質)的mRNA。RNA被靶組織的細胞吸收，并且RNA被翻譯成可表現出其生理活性的編碼的肽或蛋白質。

背景技術

使用RNA將外來遺傳信息遞送到靶細胞中提供了DNA的有吸引力的替代方案。使用RNA的優點包括瞬時表達和非轉化特征。RNA不需要進入細胞核以進行表達，而且此外RNA不會整合到宿主基因組中，從而消除腫瘤發生的風險。

可使用不同的遞送載劑，主要基于與RNA一起形成納米粒的陽離子聚合物或脂質將RNA遞送至對象。納米粒旨在保護RNA免于降解，使得能夠將RNA遞送至靶位點并促進細胞吸收和靶細胞的加工。對于遞送效力，除分子組成之外，參數如顆粒尺寸、電荷或與分子部分(例如聚乙二醇(PEG)或配體)的接枝也發揮作用。可考慮與PEG接枝來降低血清相互作用，提高血清穩定性并延長循環時間，這可有助于某些靶向方法。在靶位點與受體結合的配體可幫助提高靶向效力。此外，聚乙二醇化(PEGylation)可用于顆粒工程化。例如，如果通過將RNA的水相與脂質的有機相混合來制造脂質納米粒(Lipid Nanoparticle，LNP)，則在脂質混合物中需要一定分數的PEG-綴合的脂質，否則在混合步驟期間顆粒聚集。已表明通過改變包含不同摩爾質量的PEG的PEG-脂質的摩爾分數，可調節顆粒的尺寸。同樣，可通過改變聚乙二醇化的脂質的PEG部分的摩爾質量來調節顆粒尺寸。可獲得的典型尺寸為30至200nm(Belliveau et al，2012，Molecular Therapy-Nucleic Acids 1，e37)。如此形成的顆粒具有另外的優點，即，由于PEG部分，它們與血清組分的相互作用較少，并且具有更長的循環半衰期，這在許多藥物遞送方法中是期望的。沒有PEG-脂質，就不能形成具有離散尺寸的顆粒；顆粒形成大的聚集體和沉淀。

因此，對于其中由乙醇和水相形成LNP的技術，PEG-脂質的主要作用之一是通過在新生顆粒表面處提供空間屏障而有助于顆粒自組裝，所述新生顆粒在當核酸在包含脂質的乙醇溶液中快速混合以結合RNA時形成。PEG空間位阻阻止顆粒間融合并促進形成直徑＜100nm的均勻LNP群。

PEG是藥物遞送中使用最廣泛和金標準的“隱形(stealth)”聚合物。PEG-脂質由于其親水空間位阻特性(PEG殼防止導致聚集的靜電或范德華力吸引(Van der Waalsattraction))而通常被并入體系中來制備均勻且膠體穩定的納米粒群。聚乙二醇化使得能夠吸引聚合物周圍的水殼，保護RNA復合物免于血清蛋白的調理作用，提高血清半衰期以及降低快速腎清除，這使得改善了藥代動力學行為。脂質酰基鏈(C18、C16或C14)長度的變化改變了在顆粒中PEG-脂質并入的穩定性，這導致藥代動力學的調節。在體內與半衰期＜30分鐘的LNP解離的包含短(C14)酰基鏈的PEG-脂質的使用導致最佳的肝細胞基因沉默效力(Chen et al，2014，J Control Release 196：106-12；Ambegia et al.，2005，Biochimicaet Biophysica Acta 1669：155-163)。另外，可通過改變PEG-脂質參數來獲得對顆粒尺寸的嚴格控制：顆粒中較高的PEG MW或較高的PEG-脂質摩爾分數導致較小的顆粒。