[發明專利]莎草奧酮的微生物生產

在審

• 申請號: 201980060571.5
• 申請日: 2019-09-06
• 公開（公告）號: CN113195726A
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 萊恩·N·菲力浦;阿吉庫瑪·帕拉伊爾·庫馬蘭;克里斯汀·尼科爾·S·桑托斯;詹森·唐納德;斯蒂芬·薩里亞
• 申請（專利權）人: 馬努斯生物合成股份有限公司
• 主分類號: C12P5/00
• 分類號: C12P5/00;C12P7/26;A01N27/00;C12N9/02
• 代理公司: 北京安杰律師事務所 11627
• 代理人: 楊劍;吳立

1.一種用于產生莎草奧酮的微生物宿主細胞，所述微生物細胞表達異源α-愈創木烯合酶(αGTPS)和異源α-愈創木烯氧化酶(αGOX)。

2.如權利要求1所述的微生物細胞，所述微生物細胞進一步表達法呢基二磷酸合酶。

3.如權利要求2所述的微生物細胞，其中所述αGTPS酶包含SEQ ID NO:1至21中的任一個的氨基酸序列或其變體。

4.如權利要求3所述的微生物細胞，其中α-愈創木烯合酶包含與SEQ ID NO:1至21中的任一個具有50％或更高序列同一性的氨基酸序列。

5.如權利要求3所述的微生物細胞，其中所述αGTPS酶包含與SEQ ID NO:8具有50％或更高序列同一性的氨基酸序列。

6.如權利要求5所述的微生物細胞，其中所述αGTPS酶包含選自相對于SEQ ID NO:8的以下的位置處的一個或多個氨基酸取代：72、273、290、368、371、374、377、381、382、399、406、419、433、442、443、454、512和522。

7.如權利要求6所述的微生物細胞，其中所述αGTPS酶包含選自相對于SEQ ID NO:8的以下的一個或多個氨基酸取代：T72I、M273L、R290K、F368M、I371L、S374A、R377V、Y381W、F382L、I399V、F406L、L419T、V433I、Y442L、I443M、E454K、F512L和K522D。

8.如權利要求4所述的微生物細胞，其中所述α-愈創木烯合酶主要從FPP底物產生α-愈創木烯作為產物。

9.如權利要求1至8中任一項所述的微生物細胞，其中所述αGOX酶是細胞色素P450(CYP450)酶。

10.如權利要求9所述的微生物細胞，其中所述CYP450包含SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26的氨基酸序列或其變體。

11.如權利要求10所述的微生物細胞，其中所述CYP450包含與SEQ ID NO:51、52或22至26中的任一個具有50％或更高序列同一性的氨基酸序列。

12.如權利要求9所述的微生物細胞，其中所述CYP450包含與SEQ ID NO:51具有50％或更高序列同一性的氨基酸序列。

13.如權利要求9所述的微生物細胞，其中所述CYP450包含與SEQ ID NO:52具有50％或更高序列同一性的氨基酸序列。

14.如權利要求1至13中任一項所述的微生物細胞，其中所述微生物宿主細胞表達細胞色素P450還原酶。

15.如權利要求1至14中任一項所述的微生物細胞，其中所述αGTPS和αGOX一起在操縱子中表達。

16.如權利要求1至15中任一項所述的微生物細胞，其中所述微生物宿主細胞進一步表達一種或多種醇脫氫酶(ADH)。

17.如權利要求16所述的微生物細胞，其中所述ADH包含SEQ ID NO:35至44中的任一個的氨基酸序列或其變體。

18.如權利要求11所述的微生物細胞，其中所述ADH包含與SEQ ID NO:43具有50％或更高序列同一性的氨基酸序列。