[發(fā)明專利]對(duì)PD-1具有提高的結(jié)合親和力的PD-L1變體

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201980056951.1
• 申請(qǐng)日: 2019-06-27
• 公開（公告）號(hào): CN113195525A
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭相澤;河志妍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 國民大學(xué)校產(chǎn)學(xué)協(xié)力團(tuán)
• 主分類號(hào): C07K14/705
• 分類號(hào): C07K14/705;A61P35/00;A61K38/00
• 代理公司: 北京柏杉松知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11413
• 代理人: 劉晶晶;王慶艷

本發(fā)明涉及對(duì)PD?1具有提高的結(jié)合親和力的PD?L1變體。本發(fā)明還涉及用于制備PD?L1變體的方法和用于篩選PD?L1變體的方法。本發(fā)明的PD?L1變體通過用不同的氨基酸序列取代野生型PD?L1的一部分氨基酸序列來實(shí)現(xiàn)最優(yōu)化，從而極大地提高對(duì)PD?1的結(jié)合親和力，并通過使突變位點(diǎn)減到最少來大大降低免疫原性產(chǎn)生的可能性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及對(duì)PD-1具有增強(qiáng)的結(jié)合親和力并因此有效抑制野生型PD-L1和PD-1之間的結(jié)合的PD-L1變體，以及制備所述變體的方法。

背景技術(shù)

治療癌癥的藥物大致分為小分子藥物和大分子藥物。大分子藥物由于其高特異性而作為治療劑受到關(guān)注，而小分子藥物由于其缺乏特異性而具有相對(duì)大的副作用。

最近在學(xué)術(shù)文獻(xiàn)中的報(bào)告表明，阻斷免疫檢查點(diǎn)抑制蛋白，特別是PD-1和PD-L1之間的結(jié)合在癌癥治療中是有效的，并且PD-1和PD-L1比其他免疫檢查點(diǎn)抑制蛋白引起的副作用更少(J.Naidoo等人(2015),Annals of Oncology,Lucia Gelao等人(2014)Toxins,Gorge K.Philips等人(2015),International Immunology)。

主要的醫(yī)藥公司，包括Bristol-Myers Squibb，已經(jīng)努力通過PD-1/PD-L1免疫檢查點(diǎn)抑制來開發(fā)治療藥物，并且正在開發(fā)用于抗癌治療的藥物，例如抗體形式的YERVOY(伊匹單抗)和OPDIVO(納武單抗)。

因?yàn)镻D-1和PD-L1不僅在癌細(xì)胞中表達(dá)，而且還在人免疫細(xì)胞中表達(dá)，抗體藥物可以殺死健康免疫細(xì)胞，從而引起自身免疫疾病。

而且，作為大分子蛋白的抗體由于其體積大(150kDa)，所以很難穿透細(xì)胞。因此，需要具有突出的細(xì)胞穿透能力的治療劑以抑制腫瘤和腫瘤浸潤性淋巴細(xì)胞(TIL)之間的PD-1/PD-L1結(jié)合。

通過之前研究中的篩選，發(fā)現(xiàn)了PD-L1變體。然而，這些變體具有相對(duì)低的結(jié)合親和力并且含有許多突變，從而當(dāng)在治療藥物中使用時(shí)引發(fā)了免疫原性。因此，需要開發(fā)以高親和力結(jié)合PD-1的PD-L1變體。

提供背景技術(shù)的描述僅僅是為了更好地理解本發(fā)明的背景，而不應(yīng)被認(rèn)為對(duì)應(yīng)于本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的現(xiàn)有技術(shù)。

發(fā)明詳述

本發(fā)明要解決的問題

本發(fā)明的發(fā)明人認(rèn)真而深入地進(jìn)行了研究，以發(fā)現(xiàn)對(duì)PD-1具有高結(jié)合親和力并因此有效抑制野生型PD-L1和PD-1之間結(jié)合，同時(shí)使免疫原性的可能性最小化的PD-L1變體。結(jié)果，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了用其他最佳氨基酸取代野生型PD-L1序列中的一些氨基酸極大地改善了所得PD-L1變體對(duì)PD-1的親和力，并且盡可能少的突變位點(diǎn)降低了免疫原性的可能性。基于該發(fā)現(xiàn)已經(jīng)完成了本發(fā)明。

因此，本發(fā)明的一個(gè)目標(biāo)是提供對(duì)PD-1具有增強(qiáng)的結(jié)合親和力的PD-L1變體。

本發(fā)明的另一個(gè)目標(biāo)是提供編碼PD-L1變體的核酸分子。

本發(fā)明的另一個(gè)目標(biāo)是提供包含核酸分子的載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目標(biāo)是提供包含載體的宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供包含變體、核酸分子或載體的組合物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供用于制備所述變體的方法。

本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供用于篩選變體的方法。

根據(jù)本文的詳細(xì)描述、權(quán)利要求書和附圖，本發(fā)明的其他目標(biāo)和優(yōu)點(diǎn)將變得更加明顯。

解決問題的方法

本發(fā)明的一個(gè)方面提供了對(duì)PD-1具有增強(qiáng)的結(jié)合親和力的PD-L1變體。