[發(fā)明專利]從血液中分離靶細(xì)胞的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201980056700.3
• 申請(qǐng)日: 2019-08-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112639434A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 威廉·布薩;菲利普·H·科埃羅;喬納森·埃利斯;達(dá)力普·塞提
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 熱動(dòng)力醫(yī)療公司
• 主分類號(hào): G01N1/28
• 分類號(hào): G01N1/28;G01N33/53
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 馬叢

1.一種從血液中分離靶細(xì)胞的方法，包括：

(a)將以下在開(kāi)口容器中混合

(i)體積小于或等于10mL的未稀釋血液樣本，及

(ii)結(jié)合劑，其中每種結(jié)合劑包含(A)主要結(jié)合劑，所述主要結(jié)合劑包含能夠結(jié)合未稀釋血液樣品中靶細(xì)胞上的至少一個(gè)細(xì)胞表位的試劑，(B)結(jié)合于主要結(jié)合劑的第一接頭，

其中所述混合發(fā)生在適于促進(jìn)主要結(jié)合劑與靶細(xì)胞結(jié)合的時(shí)間和條件下，以在未稀釋的血液樣品中產(chǎn)生附接結(jié)合劑的靶細(xì)胞；

(b)將未稀釋的血液樣品中附接結(jié)合劑的靶細(xì)胞與多種懸浮劑接觸，其中每種懸浮劑包含結(jié)合到懸浮劑上的第二接頭，其中第二接頭能夠與第一接頭連接，其中所述接觸發(fā)生的時(shí)間和條件適于促進(jìn)第二接頭與第一接頭連接，以產(chǎn)生未稀釋的附接懸浮劑的靶細(xì)胞混合物；

(c)將未稀釋的附接懸浮劑的靶細(xì)胞混合物稀釋至少20％，以產(chǎn)生稀釋的附接懸浮劑的靶細(xì)胞混合物；

(d)向稀釋的附接懸浮劑的靶細(xì)胞混合物施加矢量力，例如離心力，以產(chǎn)生分層的稀釋的附接懸浮劑的靶細(xì)胞混合物；

(e)將分層的稀釋的附接懸浮劑的靶細(xì)胞混合物中的附接懸浮劑的靶細(xì)胞去除；

(f)將靶細(xì)胞從附接懸浮劑的靶細(xì)胞中分離。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述懸浮劑包括充氣氣泡。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述充氣氣泡包括被脂質(zhì)或磷脂殼包封的全氟化碳?xì)怏w核。

4.根據(jù)權(quán)利要求2～3中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述充氣氣泡的平均體積大于6μm³且小于10μm³。

5.根據(jù)權(quán)利要求2～4中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述充氣氣泡的平均直徑在1.5μm至約3μm之間。

6.根據(jù)權(quán)利要求2～5中任一項(xiàng)所述的方法，其中充氣氣泡以至少4×10⁸/mL的濃度存在于接觸步驟中。

7.根據(jù)權(quán)利要求1～6中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第二接頭包括鏈霉親和素，并且所述第一接頭包括生物素。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中鏈霉親和素以大于20000分子/μm²的濃度存在于懸浮劑上。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中鏈霉親和素以大于25000分子/μm²的濃度存在于懸浮劑上。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中鏈霉親和素以大于26000分子/μm²的濃度存在于懸浮劑上。

11.根據(jù)權(quán)利要求1～10中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述結(jié)合劑包括附接于所述第一接頭的抗體。

12.根據(jù)權(quán)利要求1～11中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述未稀釋的血液樣品的體積小于或等于5mL。

13.根據(jù)權(quán)利要求1～11中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述未稀釋的血液樣品的體積小于或等于3mL。

14.根據(jù)權(quán)利要求1～13中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述未稀釋的血液樣品的體積為1mL至3mL。

15.根據(jù)權(quán)利要求1～14中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述稀釋步驟包括將未稀釋的附接懸浮劑的靶細(xì)胞混合物稀釋20％至500％，以產(chǎn)生稀釋的附接懸浮劑的靶細(xì)胞混合物。

16.根據(jù)權(quán)利要求1～15中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述去除步驟包括使用移液管或注射器從分層的稀釋的附接懸浮劑的靶細(xì)胞混合物中去除附接懸浮劑的靶細(xì)胞。